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转录因子Oct4是POU转录因子家族成员，也被称为Oct3、OTF3或OTF4,是迄今为止发现的最重要的维持干细胞的多能性的转录因子之一，随着iPS技术的出现，Oct4成为了基因工程和细胞工程的研究热点。目前，国内外的研究多数是通过病毒载体进行包装将Oct4等转录因子导入细胞内，这样的方法在生物安全性上存在很大的风险，已经研究证实利用原核生物表达系统表达获得Oct4等转录因子蛋白，对受体细胞进行重编程获得成功，该方法从根本上避免导入外源病毒载体带来的问题。Tat是由HIV-Ⅰ编码一段富含碱性氨基酸的短肽，它能高效地介导与其共价连接的多肽、蛋白质等跨膜导入几乎所有的组织和细胞，且对细胞没有损伤，并能够保持其原有生物活性。本研究应用基因工程技术将白蛋白信号肽（HSA signal peptide, HSAsp）、Tat与人Oct4融合，在巴斯德毕赤酵母中进行融合表达Tat-Oct4重组蛋白，在醇氧化酶启动子（AOX1）调控下，经甲醇诱导，SDS-PAGE和Western blot，亲和层析和离子交换层析纯化及蛋白质N-末端测序，并对重组蛋白Tat-Oct4的生物学活性进行检测，取得以下结果：1.成功构建重组人Tat-Oct4蛋白表达载体pPICZα-HSAsp-Tat-Oct4，在电转化毕赤酵母X-33后，筛选出了稳定高效的分泌表达Tat-Oct4的工程菌株。经N-端氨基酸测序分析证明该融合蛋白具有正确序列，在80L发酵条件下进行了Tat-Oct4中试规模表达条件的优化，建立了一种适于大规模纯化Tat-Oct4重组蛋白的新方法，回收率为38.3%，纯度为95.7%。2.重组蛋白Tat-Oct4具有一定的生物活性，对脐带中成纤维细胞诱导培养后使其具干细胞的某些特征。本实验的创新之处在于：1.利用巴斯德毕赤酵母表达系统建立了制备高效分泌表达Tat-Oct4以及大规模纯化的新方法；2.证实利用单一蛋白Tat-Oct4对脐带中成纤维细胞诱导培养后，具有干细胞的某些特性。