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[研究背景]食管癌是消化道常见的恶性肿瘤,我国食管癌的绝大多数是鳞状细胞癌。由于该病的发病机制复杂且发现时大多处于晚期,因此化学治疗仍是该病的主要治疗方法之一,但化学治疗效果不够理想且副作用较大。近年从中草药中提取的多种活性成份在肿瘤治疗中展现了较好的临床效果,提高机体免疫力也可减轻放化疗副作用。华蟾素由中华大蟾蜍的干燥皮经水提醇沉法精制而成,其主要活性物质成分是吲哚生物碱,具有消肿止痛、活血化瘀、清热解毒、抗炎强心等功效,目前临床上主要用于肝癌、肺癌、食管癌等肿瘤的综合治疗。有研究表明华蟾素可上调 MDA-MB-231 细胞中促凋亡蛋白 Bax、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9,下调抑凋亡蛋白Bcl-2。华蟾素通过线粒体介导的凋亡途径诱导骨肉瘤细胞凋亡,可以降低细胞线粒体的膜电位,导致细胞色素c的释放及促细胞凋亡相关分子表达上调,进而诱导细胞凋亡。目前正在进行研究凋亡靶点包括有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、信号转导和转录激活因子-3(STAT3)和NF-κB信号通路。ERK、末端激酶(JNK)、p38、p65几种应激信号下被激活,并与诱导细胞凋亡有关。然而,华蟾素对食管癌增殖的影响及其分子机制目前研究较少。[研究目的]本课题以食管癌细胞KYSE-70为研究对象,旨在研究华蟾素对食管癌增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制,以为进一步研究华蟾素在食管癌治疗中的应用提供理论依据。[研究方法]1、使用CCK-8、LDH检测、克隆形成实验、EDU检测体外华蟾素作用后对食管癌细胞KYSE-70增殖的影响。肿瘤异种实验及免疫组化检测华蟾素在体内对食管癌细胞增殖的影响。2、选用TUNEL、DAPI、流式实验、Western blot、qPCR实验验证华蟾素诱导细胞凋亡,检测细胞凋亡率、凋亡形态以及凋亡相关蛋白的表达。3、通过ATP生成检测、线粒体膜电位、细胞氧耗检测以及细胞内谷胱甘肽氧化与还原酶的含量来研究药物华蟾素对食管癌细胞线粒体功能的影响。4、采用蛋白印迹实验方法进一步探讨华蟾素对食管癌细胞凋亡的机制。[研究结果]1、华蟾素在体内外均能够显著抑制食管癌细胞体外增殖。2、华蟾素可以诱导食管癌细胞KYSE-70凋亡,且凋亡率与药物浓度呈正相关。3、华蟾素能够显著抑制食管癌细胞线粒体的ATP生成及线粒体膜电位,同时造成细胞内ROS过量积累,GSH含量降低。4、华蟾素在体外华蟾素通过ROS/MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡。[研究结论]研究结果表明,华蟾素通过ROS/MAPK和NF-κB信号通路促进食管癌细胞凋亡,这为进一步研究华蟾素在食管癌治疗中的应用提供理论依据。