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目的:1.探讨亚慢性PAHs混合物暴露对雄性SD大鼠神经行为损伤的影响及可能机制。2.通过基因芯片筛选大鼠海马组织中差异表达的microRNA,并进行生物信息学分析,为PAHs神经毒性的分子机制提供更多线索。方法:1.健康SPF级雄性SD大鼠40只,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别腹腔注射植物油、3.2mg/kg·bw、8.0mg/kg·bw、20.0mg/kg·bw PAHs混合物溶液,隔天注射,共60天。染毒结束后,采用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,旷场实验检测大鼠对新异环境的适应能力。2.行为学实验结束后,断头处死大鼠,取脑组织并分离海马。采用化学荧光法测定活性氧含量,硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量,水溶性氮蓝四唑盐法检测超氧化物歧化酶活力;酶联免疫吸附实验检测单胺类神经递质(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺)水平;微板法检测乙酰胆碱含量;比色法检测乙酰胆碱酯酶活力;紫外比色法检测谷氨酸含量。3.提取大鼠海马组织RNA,基因芯片筛选差异表达的miRNA。运用Targetscan数据库对差异表达的miRNA进行靶基因预测,GO数据库对靶基因进行功能预测,KEGG数据库进行通路分析。4.采用SAS 9.4和Graphpad Prism 7.0软件进行统计分析和作图,统计学水准为双侧α=0.05。结果:1.PAHs染毒后大鼠体质量变化:在染毒第56天后,与对照组相比,高剂量组大鼠体质量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。2.Morris水迷宫实验结果:与对照组相比,低、中、高剂量组大鼠目标象限停留时间逐渐降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);低、中剂量组大鼠目标象限休息时间高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。3.旷场实验结果:各组大鼠站立时间总体差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组与对照、低剂量组相比站立时间显著降低,差异有统计学意义(P=0.017,P=0.010)。4.氧化应激反应:各组大鼠活性氧含量总体差异有统计学意义(P=0.031),与对照组相比,中剂量组活性氧含量升高(P=0.007)。5.单胺类神经递质比较:各组大鼠多巴胺含量比较差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,低、中、高剂量组多巴胺含量均上升,差异均有统计学意义(P=0.016,P=0.002,P=0.001)。6.胆碱能神经递质比较:各组大鼠乙酰胆碱含量和乙酰胆碱酯酶活力总体差异无统计学意义(F=0.466,P=0.709;F=0.105,P=0.956)。7.氨基酸神经递质比较:各组大鼠谷氨酸含量比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,低、高剂量组谷氨酸含量均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。8.PAHs暴露导致大鼠海马组织中miRNA表达谱改变,共筛选得到差异表达的miRNA 29个,其中28个显著下调,1个显著上调。9.靶基因预测和生物信息学分析:选择在三个比较组中表达均下调的miRNA(miR-211-3p、miR-667-3p和miR-3575-3p)进行靶基因预测发现:通过Targetscan数据库搜索,共鉴定了3个miRNA的315个靶基因。GO富集分析表明,差异表达的miRNA主要富集于生物过程、分子功能、分子成分、蛋白质结合、细胞内钠激活钾通道活性、糖鞘脂的生物合成-乳酸和新乳酸酯、RNA转运等。KEGG通路分析显示了许多重要的通路,包括心律失常性右室心肌病通路、糖鞘脂的生物合成-乳酸和新乳糖通路及RNA转运通路等。结论:1.PAHs暴露导致SD大鼠生长发育迟缓,学习记忆能力下降,焦虑相关行为增加。2.PAHs暴露导致大鼠神经行为的损伤可能与氧化应激、神经递质含量改变以及miRNA表达改变有关。