【摘 要】
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目的:S100钙结合蛋白A8(S100A8)和A9(S100A9)属于S100钙结合蛋白家族,在炎症中起重要作用。本实验探究S100A8/9在内皮细胞中的作用机制,探讨S100A8/9在静脉内膜重塑中扮演的角色。方法:1.通过兔移植静脉模型的基因数据分析S100A8/9在静脉重塑过程中的表达水平;2.通过添加外源性S100A8/9刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs),通过CCK-8、Transwel
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目的:S100钙结合蛋白A8(S100A8)和A9(S100A9)属于S100钙结合蛋白家族,在炎症中起重要作用。本实验探究S100A8/9在内皮细胞中的作用机制,探讨S100A8/9在静脉内膜重塑中扮演的角色。方法:1.通过兔移植静脉模型的基因数据分析S100A8/9在静脉重塑过程中的表达水平;2.通过添加外源性S100A8/9刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs),通过CCK-8、Transwell迁移实验、血管形成实验观察细胞增殖、迁移、血管形成能力的影响;3.细胞流式实验检测S100A8/9对HUVECs细胞周期的影响。4.Western Blot、qPCR检测PI3K/Akt/mTOR信号通路和mTORC2以及他们的下游分子;5.使用RAGE特异性抗体以及小干扰RNA转染术检测RAGE和Rictor在S100A8/9信号通路中的作用;结果:1.在兔静脉移植模型中,手术后1天和7天S100A8/9表达持续增高;2.S100A8/9刺激HUVECs增殖、迁移和血管形成能力增加;3.S100A8/9刺激PI3K/Akt/mTOR,以及与之相关的抗凋亡蛋白Bcl-2和mTORC2信号通路;4.RAGE特异性抗体和雷帕霉素显著抑制被S100A8/9激活PI3K/Akt/mTOR通路。此外,RAGE特异性抗体阻断mTORC2信号通路,而雷帕霉素无阻断效果;5.利用特异性siRNA抑制Rictor或RAGE表达可降低S100A8/9引起的HUVECs的细胞活力,迁移和血管生成;结论:1.S100A8和S100A9在静脉移植模型中表达增加。2.S100A8/9通过RAGE激活PI3K/Akt/mTOR和mTORC2信号通路从而使细胞增殖、迁移以及成血管能力增加。3.S100A8/9刺激血管内皮细胞增殖可能保护移植静脉内皮细胞完整性,从而预防NIH导致的静脉移植失败。
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