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研究背景硫化氢(H2S)是一种重要的气体信号分子,其对细胞膜上多种离子通道有调控作用。肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla chromaffin cells,AMCs)分泌的儿茶酚胺(catecholamine, CA)在应激反应中起到了至关重要的作用。CA参与出生阶段呼吸与心血管调节,帮助新生鼠适应子宫外的环境。我们先前的研究揭示了H2S可以通过抑制钙依赖型钾通道[IK(Ca) current]引起大鼠AMCs分泌CA。然而,H2S是否能触发NRACCs释放儿茶酚胺CA尚不清楚。在我们的研究中,我们使用碳纤维电极(cabon fiber electrode, CFE)安培法和全细胞记录膜片钳技术,探究了H2S能否引起新生鼠AMCs量子化释放CA以及H2S引起的新生鼠和成年鼠嗜铬细胞CA分泌的动力学差异。材料和方法实验选择0到7天的新生鼠三只,取出一共六个肾上腺,立即放入D-hanks溶液中。剪除肾上腺皮质,然后把髓质单独放在D-Hanks溶液中。然后将溶液中的髓质放入0.6ml混合酶液中(胶原酶I3mg/ml,牛血清白蛋白3mg/ml,DNA酶0.23mg/ml,透明质酸酶2.4mg/ml)37℃恒温消化20分钟。消化后,用200μl移液器将髓质吹散。最后,将细胞固定于盖玻片(用PLL处理过)上然后加入DMEM高糖培养基中(含10%FBS),暂时放入37℃恒温箱中。新生鼠的嗜铬细胞需要在12小时内使用。实验操作中,含有原代培养的细胞玻片需放入记录皿中,并且以1ml/min的速度用标准的细胞外液持续灌流。使用5微米的碳纤维电极检测新生鼠儿茶酚胺的释放。全细胞记录使用膜片钳放大器为Axon公司的700B型放大器,玻璃电极电阻为6-10MΩ。所有数据均采用均数±标准误表示,采用单因素方差分析比较多组间的差异,t检验比较两组间的差异,以P<0.05为显著性差异界值。结果1.外源性硫化氢可以触发新生鼠肾上腺髓质嗜铬细胞分泌儿茶酚胺。2.外源性硫化氢通过抑制钙依赖性钾通道引起细胞膜去极化。3.外源性硫化氢引起的新生鼠和成年鼠儿茶酚胺的量子释放有动力学的差异。表现在通过单个囊泡的释放,对比成年鼠而言,新生鼠的分泌量较少但是分泌速度较快。结论外源性的硫化氢可以直接引起新生鼠肾上腺髓质嗜铬细胞儿茶酚胺的量子化释放。相比较成年鼠而言,动力学分析显示新生鼠有较快的分泌时间和较少的分泌量。我们的研究结果提示硫化氢引起的新生鼠肾上腺髓质嗜铬细胞儿茶酚胺的释放可能会帮助新生鼠耐受低氧应激性的损伤。