目的:探索金钗石斛生物碱(Dendorbium Nobile Lindl.alkaloids,DNLA)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV2细胞炎症反应的保护作用及其作用机制。方法:以BV2细胞与LPS共同孵育构建神经细胞炎症模型。将BV2随机分为空白组,DNLA(350 ng/mL)单独给药组,LPS(100 ng/mL)组,LPS+DNLA(3.5 ng/mL)组和LPS+DNLA(350 ng/mL)组。给予同体积无血清培养基和各浓度DNLA预处理1h,加入LPS(100 ng/mL)诱导BV2细胞,使其激活并产生炎症反应。通过MTT法检测BV2细胞的增殖筛选最佳造模浓度;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α的释放量确定筛选造模时间;Western Blot检测细胞总蛋白裂解液中Iba-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、NEK7、GSDMD,以及胞浆蛋白提取液和胞核蛋白提取液中NF-κB p65及其磷酸化产物p-NF-κB p65、κBα及其磷酸化产物p-IκBα的蛋白表达水平;IF技术检测Iba-1蛋白变化、NF-κB在BV2细胞核内表达水平和NLRP3炎症小体的激活状态,以及RT-PCR技术检测BV2细胞中Il-1βmRNA变化。结果:(1)MTT、ELISA和Western Blot等实验结果说明,LPS诱导浓度为100 ng/mL时,诱导效果最佳,诱导24h时,上清液中TNF-α含量达到最大值;诱导1h时,胞浆中p-IκBα和胞核中p-NF-κB蛋白表达显著增加;(2)给予DNLA处理后,ELISA检测细胞上清液中TNF-α含量结果显示,LPS+DNLA(3.5 ng/mL)组和LPS+DNLA(350 ng/mL)组细胞上清液中TNF-α含量显著降低;Western Blot和免疫荧光结果显示,DNLA可以抑制BV2细胞的激活,减少NLRP3炎症小体的活化,抑制TLR4受体激活,影响IκBα和NF-κB在细胞质和细胞核内的蛋白表达水平,以及抑制NF-κB向细胞核转移过程,此外,DNLA还可以抑制NLRP3炎症小体组成部件ASC、caspase-1的剪切和活化;RT-PCR检测Il-1β的mRNA水平结果显示,LPS(100 ng/mL)处理BV2细胞3h时,Il-1βmRNA水平显著升高,DNLA(350 ng/mL)中Il-1βmRNA水平显著降低;(3)Western Blot实验结果显示,空白组,DNLA(350 ng/mL)单独给药组,LPS(100 ng/mL)组,LPS+DNLA(3.5 ng/mL)组和LPS+DNLA(350 ng/mL)组之间GSDMD蛋白水平无明显变化,但是,LPS(100 ng/mL)组cleaved-GSDMD蛋白表达显著增加,LPS+DNLA(350 ng/mL)组相较于LPS(100 ng/mL)组显著减少;此外,LPS(100 ng/mL)组NEK7蛋白水平同时表现出升高,LPS+DNLA(350 ng/mL)组相较于LPS(100 ng/mL)组显著降低。结论:DNLA能够抑制LPS诱导的BV2细胞神经炎症反应,该效应可能与调控NF-κB/NLRP3通路有关。