无子西瓜体细胞胚胎的诱导及其影响因素的研究

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本文研究了无子西瓜体细胞胚胎发生的条件及其影响因素,找出了无子西瓜体细胞胚胎的最适诱导条件,并对体细胞胚胎的发生过程进行了细胞学观察,应用ELISA研究了在体细胞胚胎的发生过程中外源激素对内源激素表达水平的影响。 1、对3种基因型无子西瓜体细胞胚胎发生研究结果表明,郑抗无子4号体细胞胚胎的诱导率为25.0%,高于农大无子五号和台湾新一号。 2、以子叶为外植体,无菌苗苗龄6d时诱导体细胞胚胎的效果最好。体细胞胚胎的发生有直接和间接两种途径,以间接途径为主。 3、2,4-D及其与6-BA配合使用诱导的多为非胚性愈伤组织;IAA的诱导效果明显好于2,4-D,与6-BA组合可诱导出少量农大无子五号和台湾新一号的胚性愈伤组织;6-BA、KT和GA3搭配使用可诱导出大量郑抗无子4号的体细胞胚胎。30g·L-1的蔗糖为诱导体细胞胚胎的最佳碳源。前期对外植体的暗处理是体细胞胚胎诱导的必需条件,后期需要在16h光/8h暗的条件下培养。 4、不同基因型无子西瓜体细胞胚胎诱导的最适培养基不同,台湾新一号为MS+6-BA3.0mg·L-1+IAA1.0mg·L-1,农大无子五号为MS+6-BA3.0mg·L-1+IAA0.5mg·L-1,郑抗无子4号为MS+6-BA2.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1+GA31.0mg·L-1。 5、继代次数对愈伤组织诱导有较大影响,以继代3次时愈伤组织的诱导率最高,此后逐渐下降。 6、较高的内源IAA水平、子叶高水平的内源ZR、适当的GAs含量是诱导愈伤组织、胚状体和不定芽的前提条件。IAA/ZR比值处于高水平,容易诱导愈伤组织和胚状体以及不定芽的分化;IAA/GAs值和IAA/ABA值较高容易诱导出愈伤组织和胚状体;高ZR/GAs水平是诱导胚状体的条件,诱导出来以后,需要在低ZR/GAs水平,胚状体才能生长良好。1.0mg·L-1GA3促进内源激素IAA、ZR和ABA表达,有利于细胞的分化,KT通过提高内源IAA和ZR的表达水平来促进体细胞胚胎的发生。 7、在附加物质抗褐变的处理中,添加AC的褐变率仅为21.3%,低于添加LH和Vc的褐变率;就体细胞胚胎诱导率而言,除CK处理外也是添加AC时的诱导率最高,为21.5%。 8、石蜡切片观察表明,体细胞胚发生从胚性细胞起,历经早期原胚、球形胚、心形胚利鱼雷胚,最后到成熟子叶胚,与合子胚胎发育过程相似。子叶胚经培养即可发育为再生植株。 9、郑抗无子四号在IBA浓度为0.1mg·L-1时,生根率最高为86.7%;农大无子五号在IBA浓度为0.3mg·L-1时,生根率最高为86.7%;台湾新一号在IBA浓度为0.5mg·L-1时,生根率最高为83.8%。郑抗无子四号生根最好;农大无子五号和台湾新一号须根多,无明显主
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