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目的:1.研究神经肽 S(neuropeptide s,NPS)对甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)诱导的大鼠刻板行为的影响,NPS对METH所致海马、纹状体谷氨酸释放的影响。2.METH对大鼠脑脊液中的内源性NPS的影响。3.METH对大鼠海马、纹状体中神经肽S受体(neuropeptide s receptor,NPSR)蛋白表达的影响。方法:1.健康的雄性SD大鼠随机分为4组(侧脑室注射盐水+腹腔注射盐水,侧脑室注射盐水+腹腔注射METH,侧脑室注射NPS+腹腔注射盐水,侧脑室注射NPS+腹腔注射METH),通过侧脑室置管预先给予NPS(10nmol/rat)域同体积生理盐水,预处理30min后,通过腹腔注射METH(10mg/kg)或同体积生理盐水。观察记录1小时内动物的行为学改变并进行刻板行为计数,通过高效液相色谱技术分析大鼠海马、纹状体中谷氨酸水平。2.健康的雄性SD大鼠随机分为2组(METH组和盐水对照组),腹腔注射METH10mg/kg或同体积生理盐水,注射1小时后测定脑脊液中内源性NPS含量。3.大鼠纹状体、海马原代神经元随机分为4组(METH1、4、16mmol/L和对照组),给药24 h后,使用显微镜观察纹状体和海马神经元的形态学改变;Westerm印迹法和免疫荧光法测定纹状体、海马神经元的NPSR表达水平,并分析各组间NPSR表达水平的差异。结果:1.NPS对METH诱导的刻板行为的影响与侧脑室注射盐水+腹腔注射盐水比较,侧脑室注射盐水+腹腔注射METH组大鼠的刻板行为计数增加。刻板行为计数在给药10分钟后开始出现上升趋势,并在25分钟时达到高峰,25分钟到60分钟保存稳定。与侧脑室注射盐水+腹腔注射METH比较,侧脑室注射NPS+腹腔注射METH组大鼠的刻板行为计数无显著差异。2.NPS对METH诱导的各类型刻板行为的影响侧脑室注射NPS+腹腔注射METH与侧脑室注射盐水+腹腔注射METH比较,转圈行为显著减少(p<0.05),嗅探行为无显著影响(p>0.05)。NPS预处理可以减少METH给药后的转圈行为。3.高效液相色谱技术分析NPS对纹状体和海马中METH诱导的谷氨酸释放的影响侧脑室注射盐水+腹腔注射METH与侧脑室注射盐水+腹腔注射盐水比较,纹状体、海马谷氨酸水平增加(P<0.01),METH可以促进纹状体、海马谷氨酸神经递质的释放。侧脑室注射NPS+腹腔注射METH与侧脑室注射盐水+腹腔注射METH 比较,纹状体、海马谷氨酸水平减少(p<0.01,p<0.05),NPS预处理可以抑制METH对谷氨酸神经递质释放的促进作用。4.高效液相色谱技术分析NPS对纹状体和海马中METH诱导的GABA释放的影响侧脑室注射盐水+腹腔注射METH与侧脑室注射盐水+腹腔注射盐水比较,纹状体、海马谷氨酸水平无显著改变(P>0.05),METH对GABA神经递质的释放无显著影响。侧脑室注射NPS+腹腔注射METH与侧脑室注射盐水+腹腔注射METH比较,纹状体、海马GABA水平无显著改变(p>0.05)。5.METH对脑脊液中内源性NPS水平的影响与盐水腹腔注射比较,METH腹腔注射对脑脊液中内源性NPS水平无显著影响(p>0.05)。6.倒置相差显微镜观察METH对纹状体、海马原代神经元形态的影响显微镜观察发现,METH 4 mmol/L组的纹状体、海马原代神经元胞体萎缩,突起变短、断裂甚至消失,网络结构基本消失,可见细胞脱壁漂浮现象,METH 16mmol/L组的纹状体、海马原代神经元突起消失增多,脱壁漂浮现象增加。7.Westem-blot分析METH对NPSR表达水平的影响Westerm印迹法检测结果表明,与对照组相比,METH 4和16 mmol/L组的纹状体神经元NPSR表达显著减少(P<0.05);与对照组相比,METH4和16 lnmol/L组的海马神经元NPSR表达显著减少(P<0.01,P<0.05)。8.免疫荧光技术分析METH对NPSR平均光密度的影响免疫荧光法测定结果发现,与对照组相比,METH4和16mmol/L组的纹状体和海马神经元NPSR平均光密度显著减少(P<0.01,P<0.05;P<0.01,P<0.05)。Western印迹法和免疫荧光法结果一致。结论:NPS减少METH介导的刻板转圈行为,NPS预处理可以抑制METH对纹状体海马谷氨酸的释放作用。METH不会影响脑脊液中NPS水平。METH减少纹状体和海马神经元NPSR表达。