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目的研究基因沉默Nueropilin-1对胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的影响。方法以胃癌HGC27细胞作为研究对象,采用TGF-β1刺激诱导细胞EMT模型;将靶向NRP1-si RNA稳定转染至HGC-27细胞;划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)和Western blot检测NRP1和EMT相关标记物(E-cadherin,vimentin,snail)的表达水平。结果1 TGF-β1诱导胃癌HGC-27细胞EMT模型:5 ng/m LTGF-β1刺激组细胞形态由卵圆石样转变为长梭形、纺锤体状,细胞间隙增大。划痕显示刺激组划痕愈合面积较空白组明显增加(P<0.05)。Transwell结果显示刺激组细胞穿透小室细胞数较空白组明显增多(P<0.05)。q RT-PCR结果显示TGF-β1刺激细胞后,E-cadherin的m RNA相对表达量明显降低,Vimentin、Snail以及NRP1的m RNA相对表达量显著升高(P<0.05)。Western blot结果显示刺激组E-cadherin蛋白明显减少,Vimentin、Snail及NRP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。验证成功建立EMT模型。2 NRP1在胃癌HGC-27细胞中的表达及沉默:空白对照组(CON):转染PBS;无意义序列组(NC):转染NC-si RNA;转染组(si NRP1)转染NRP1-si RNA,验证转染效率。q RT-PCR结果及Western blot结果显示,与NC和CON组相比,靶向si NRP1转染组中胃癌HGC-27细胞的NRP1 m RNA及蛋白相对表达表达水平显著降低(0.47倍)(P<0.05)。验证转染沉默效果满意。3基因沉默NRP1后可以抑制胃癌HGC-27细胞的迁移和侵袭:转染实验中,在划痕后24和48 h,si NRP1组的伤口愈合面积较CON组和NC组的显著减少(P<0.05)。Transwell实验显示,si NRP1组细胞跨膜迁移及侵袭的细胞数较CON和NC组明显减少(P<0.05)。4沉默NRP1可以抑制TGF-β1诱导胃癌HGC-27细胞EMT模型后细胞的侵袭、迁移和逆转EMT过程:在划痕24和48 h后,TGF-β1+si NRP1组较其他各组的伤口愈合小(P<0.05);Transwell结果显示,TGF-β1+si NRP1组的迁移和侵袭细胞数较其他组显著减少(P<0.05)。在胃癌EMT基础上转染si NRP1沉默NRP1,分为四组:Blank组(未经处理);TGF-β1+CON组(TGF-β刺激+转染PBS);TGF-β1+NC组(TGF-β1刺激+转染si NC);TGF-β1+si NRP1组(TGF-β1刺激+NRP1-si RNA转染),q RT-PCR结果及Western blot结果显示,各组间比较,TGF-β1+si NRP1组的E-cadherin表达显著升高,Vimentin和Snail表达量呈显着下调(P<0.05)。结论TGF-β1诱导建立胃癌EMT条件下,沉默NRP1可以抑制细胞的迁移、侵袭,可以逆转TGF-β1诱导的胃癌EMT过程。图4幅;表2个;参147篇。