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背景:过敏性疾病是临床上常见的多发疾病,过敏性哮喘是过敏性疾病中最常见的一种,如果疏于防治,可伴随终生。据统计全球哮喘患者高达3亿人,我国占据10%。目前过敏原特异性免疫治疗是治疗过敏性疾病最有效的对因治疗方法,尘螨是人类室内最经常接触到的过敏原,具有超强致敏能力的粉尘螨(Dermatophagoides farina)诱发的尘螨过敏性哮喘值得关注。尘螨过敏性哮喘特异性免疫治疗主要是使用粉尘螨粗浸液变应原治疗,其治疗效果显著但在临床上的应用极为有限(矛盾)。由于应用粗浸液会导致临床应用上有许多副作用。因此,探讨更有效的过敏原特异性免疫治疗allergen-specific immunotherapy,ASIT)治疗方式具有重大意义。葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)是由革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)分泌的肠毒素。研究表明,SEB在低浓度时可作为诱导免疫耐受,SEB可作为佐剂增强免疫治疗的效果。目的:将粉尘螨中最主要的过敏原Der f 1与SEB连接形融合蛋白Der f 1-SEB,并进行大量表达和纯化获得高浓度的单一组分的重组蛋白;进行细胞实验探讨最佳实验浓度和探索其诱导免疫耐受的初步机制;进行动物模型实验,验证脱敏治疗的疗效。方法:1)利用原核表达系统,通过Ni柱纯化,得到单一组分的高浓度重组蛋白Der f 1-SEB以及Der f 1和SEB蛋白。2)细胞实验:培养BMDC,通过BMDC的单独培养,检测其表型Foxp3和TGF-β的表达情况,以及IL-10的表达。通过BMDC与脾细胞共培养,检测Treg表达情况和TGF-β和IL-10的表达。3)动物实验:通过粉尘螨粗提液和佐剂建立尘螨过敏性哮喘动物模型,通过检测血清中特异性抗体、脾细胞培养基上清、肺组织切片、Western Blot检测、流式细胞术等方法判断治疗是否成功。结果:双酶切结果说明质粒构建成功,并通过原核表达系统获得高纯度的重组蛋白Der f 1-SEB、Der f 1和SEB蛋白。Der f 1-SEB可上调BMDC中Foxp3、TGF-β及IL-10的表达;还可使得与BMDC共培养的T细胞分化出调节性T细胞。动物实验中,肺组织HE染色、肺泡灌洗液细胞甩片、肺组织Western Blot、脾细胞上清结果均表明Der f 1-SEB的对于哮喘有较好地治疗效果。结论:成功表达出融合蛋白Der f 1-SEB,该蛋白可作为尘螨过敏性哮喘的脱敏疫苗,有效缓解小鼠尘螨过敏性哮喘的症状。