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目的：研究ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231与ER阳性乳腺癌细胞MCF-7中Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs),即TLR1-TLR10的表达情况。选择差异表达的TLR4和TLR5进行启动子活性分析,研究TLR4和TLR5转录调控在不同亚型乳腺癌细胞中的作用,确定关键的转录调节因子,为研究转录因子对乳腺癌细胞的作用奠定实验基础,并为乳腺癌治疗提供新的作用靶点。方法：(1)采用逆转录PCR和荧光实时定量PCR的方法检测人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中TLRs mRNA表达情况及表达差异。(2)通过生物信息学预测工具,预测TLR4和TLR5启动子区域上的转录因子结合位点,与此同时设计转录因子结合位点突变,构建三组荧光蛋白报告基因表达载体,分别是：TLR4-AP-1-pECFP-N1、 TLR4-Sp1-pECFP-N1和TLR5-Sp1-pECFP-N1,第一组是TLR4启动子转录因子AP-1结合位点的野生型和突变型的载体构建,第二组是TLR4启动子转录因子Sp1结合位点的野生型和突变型的载体构建,第三组是TLR5启动子转录因子Sp1结合位点的野生型和相应的突变型的载体构建,共15个重组质粒,分别命名为：TLR4-AP-1-R、 TLR4-AP-1-MRR、TLR4-AP-1-MLR、TLR4-AP-1-MR; TLR4-Sp1-WTF、TLR4-Sp1-MRF、 TLR4-Sp1-MLF; TLR5-F2-R、TLR5-F2-Rb、TLR5-F2-WTRc、TLR5-F2-MRc; TLR5-F1-R、 TLR5-F1-Rb、TLR5-F1-WTRc、TLR5-F1-MRc。(3)采用脂质体转染技术,将三组构建的载体,即：TLR4-AP-1-pECFP-N1、TLR4-Sp1-pECFP-N1和TLR5-Sp1-pECFP-N1都分别单独地转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7,并用空载体pECFP-N1组和未转染组分别做阳性对照和空白对照。转染TLR4-AP-1-pECFP-N1、TLR4-Sp1-pECFP-N1和TLR5-Sp1-pECFP-N1组载体以及pECFP-N1到两种细胞中,不转染组为对照,由于野生型或突变型启动子能启动荧光蛋白报告基因的表达,通过激光扫描共聚焦显微镜观察荧光蛋白报告基因的活性,确定TLR4和TLR5的野生型和突变型启动子在两种不同细胞中的活性,并比较野生型和突变型启动子的荧光蛋白信号,确定重要的转录调控因子。结果：(1)在人乳腺癌ER阴性细胞MDA-MB-231中,TLR1-TLR10mRNA水平上均有表达,但各受体之间的表达量有差异；在人乳腺癌ER阳性细胞MCF-7中,除没有检测到TLR7和TLR8受体的mRNA水平表达以外,其余受体均有表达,且表达有差异。通过比较TLR4和TLR5mRNA水平的相对表达,发现在MDA-MB-231中TLR4的表达是MCF-7中的7.8倍,TLR5的表达是MCF-7中的1.4倍。(2)荧光蛋白报告基因表达载体TLR4-AP-1-pECFP-N1、TLR4-Sp1-pECFP-N1和TLR5-Sp1-pECFP-N1成功构建。(3)细胞转染效率较高。在乳腺癌细胞MDA-MB-231中,载体组TLR4-AP-1-pECFP-N1的野生型与突变型启动子启动荧光蛋白报告基因表达的强度明显不同,但是在乳腺癌细胞MCF-7中没有显著差别。而在载体组TLR4-Spl-pECFP-N1和TLR5-Spl-pECFP-N1中的野生型和突变型启动子均能启动荧光蛋白报告基因表达,但是它们之间没有明显差别。结论：人乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达TLR1-TLR10,MCF-7中除TLR7和TLR8不表达外,其余TLRs均表达；针对TLR4和TLR5启动子区域分别设计转录因子结合位点AP-1位点和Sp1位点的突变,通过荧光蛋白报告基因的实验已证明AP-1位点的突变能降低TLR4启动子在MDA-MB-231中的活性,说明转录因子AP-1在MDA-MB-231细胞中对TLR4的转录调控起重要作用,为乳腺癌的靶向药物设计提供可靠的靶向治疗靶点。