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目的:本研究验证了TFF3基因在宫颈腺癌和宫颈鳞癌中存在表达差异,在宫颈腺癌中TFF3明显高表达,进一步研究TFF3可以调节宫颈腺癌细胞生物学行为,并且能够激活PI3K/AKT信号通路及其下游基因Twist1,从而阐明TFF3在宫颈腺癌发生发展中的作用,为宫颈腺癌发病机制的研究提供新的实验依据。方法:以宫颈腺癌细胞系(Hela细胞)和宫颈鳞癌细胞系(Siha细胞)以及宫颈腺癌和鳞癌组织标本为研究对象。通过实时荧光定量PCR检测宫颈腺癌和宫颈鳞癌细胞系及组织中的TFF3mRNA表达水平,免疫组化实验用以检测宫颈腺癌和宫颈鳞癌组织中TFF3蛋白的表达差异。利用生物信息学方法分析TFF3可能的下游基因及可能存在的信号调节通路。将TFF3细胞因子以浓度不同分为四组0ng/ml、100ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml,分别处理宫颈腺癌细胞系,利用CCK-8法检测处理后Hela细胞的增殖能力,利用Transwell小室检测处理后细胞的迁移能力。TFF3细胞因子和PI3K/AKT通路抑制剂(LY294002)处理Hela细胞,设置TFF3组、抑制剂组、共同作用组(同时加入两种处理因素)和对照组(未进行处理),分别利用CCK-8实验和Transwell小室研究不同因素处理后Hela细胞增殖和迁移能力的改变,Western Blot方法用以观察四组实验中Hela细胞的AKT、pAKT及Twist1蛋白表达情况,流式细胞学计数用以检测不同作用因素处理对Hela细胞凋亡的影响。采用SPSS17.0统计学软件处理结果。结果:1.实时荧光定量PCR的结果表明,在宫颈腺癌细胞中TFF3mRNA的表达水平明显高于宫颈鳞癌细胞(p<0.05),宫颈腺癌与鳞癌组织标本中存在同样的TFF3mRNA表达差异(p<0.05),差异均有统计学意义。2.免疫组化结果进一步证实了TFF3蛋白在宫颈腺癌与鳞癌中存在表达差异,且在宫颈腺癌中的表达明显增高(p<0.05),差异有统计学意义。3.利用生物信息学方法对TFF3基因进行分析,STRING10蛋白互作分析显示TFF3与Twist1蛋白间存在相互作用,KEGG通路分析结果提示TFF3基因与PI3K/AKT信号通路存在调节关系。4.TFF3细胞因子处理Hela细胞后,随着作用时间的增长,Hela细胞的增殖逐渐增强(p<0.05),且随TFF3浓度的增高Hela细胞增殖能力增强(p<0.05)。不同浓度TFF3细胞因子作用Hela细胞后,其迁移能力随TFF3浓度的升高而增强(p<0.01)。5.利用抑制剂LY294002和TFF3分别处理Hela细胞后,与对照组相比,TFF3组Hela细胞增殖明显升高,抑制剂组细胞增殖明显减弱,共同作用组细胞增殖能力处于两者之间,其中24h作用时间的结果最为明显(p<0.05)。不同处理因素作用Hela细胞后,其迁移能力与对照组相比,TFF3组明显增强,抑制剂组明显减弱(p<0.05),共同作用组Hela细胞迁移能力与TFF3组相近明显强于抑制剂组和对照组。6.Western Blot实验结果表明,随TFF3细胞因子浓度增高,pAKT蛋白表达逐渐增多,TFF3浓度为200ng/ml时对pAKT的激活作用最强(p<0.05),浓度为500ng/ml时激活作用减弱。随处理时间增长,TFF3激活pAKT蛋白表达的作用增强,作用时间为30分钟激活做最强(p<0.05),其后随时间延长TFF3的激活作用逐渐减弱。AKT蛋白表达不受TFF3细胞因子作用的影响。TFF3和抑制剂共同处理Hela细胞后,与对照组相比,TFF3组pAKT和Twist1蛋白的表达均增强,而抑制剂组pAKT和Twist1蛋白表达明显降低(p<0.05),共同作用组pAKT和twist1的蛋白表达量介于两组之间,Twist1的蛋白表达明显高于对照组(p<0.05)。AKT蛋白表达在各处理组之间无明显差异。7.流式细胞学计数分析结果表明,TFF3和抑制剂分别作用Hela细胞后,抑制剂组Hela细胞凋亡比例明显增多(p<0.01),TFF3组Hela细胞凋亡明显减弱,共同作用组细胞凋亡比例处于两处理组之间(p<0.05),与对照组细胞凋亡比例相比差异均有统计学意义。结论:在宫颈腺癌中存在高表达的TFF3基因,能够通过激活PI3K/AKT信号通路增强Hela细胞增殖和迁移的能力并抑制其凋亡,并且能够提高Twist1基因的表达,为宫颈腺癌发病分子机制的研究提供新的理论依据。