【摘 要】
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RNaseP是广泛存在于各种细胞内的一种核蛋白复合体，它可以在体内特异性的剪切tRNA前体（ptRNA）的5’末端，形成成熟的tRNA。RNaseP是一种结构识别酶，它的模式底物至少要包括两个要件：1、游离的CCA-3’末端；2、特异的互补的双链区域。人工设计的外部引导序列（External Guide Sequence，EGS）是能与底物mRNA形成类似ptRNA的核酸序列，并能引导RNaseP
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RNaseP是广泛存在于各种细胞内的一种核蛋白复合体，它可以在体内特异性的剪切tRNA前体（ptRNA）的5’末端，形成成熟的tRNA。RNaseP是一种结构识别酶，它的模式底物至少要包括两个要件：1、游离的CCA-3’末端；2、特异的互补的双链区域。人工设计的外部引导序列（External Guide Sequence，EGS）是能与底物mRNA形成类似ptRNA的核酸序列，并能引导RNaseP对底物mRNA进行切割，从而阻断了该基因的表达。EGS可以分为RNA-based EGS和DNA-based EGS，两种EGS，都能有效引导切割底物mRNA。 本课题是以人巨细胞病毒（HCMV）ULM9基因mRNA片段为靶序列，针对该序列设计DNA-based EGS，研究在细胞内DNA-based EGS对UL49基因表达的抑制作用。 pEGFP-N1绿色荧光蛋白质粒是一种真核表达载体，克隆HCMVULM9基因融合表达于EGFP的N端，将设计的DNA-based EGS与pEGFP-N1-UL49用脂质体共同转染Hela细胞，培养24小时后，通过显微镜观察和流式细胞仪检测细胞的绿色荧光，从而得出UL49的表达水平，并用荧光定量PCR的方法直接检测EGS对UL49mRNA的切割效率。 结果显示所设计的4个DNA-based EGS均能抑制HCMVUL49的基因表达，为其进一步直接应用于抗病毒实验中打下基础，并证实了DNA-bascd EGS技术在抗病毒应用中具有很高的潜力。
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