研究背景：　　上皮性卵巢癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，为引起妇女死亡的第五大肿瘤，全球发病率逐年增加，且有年轻化的趋势。由于卵巢癌起病隐匿，缺乏早期筛查手段，大部分患者初诊即为晚期，错过了手术治疗的机会。虽然早期卵巢癌患者5年生存率为70％~90%，但其诊断率却只20%左右，况且术后极易复发及转移，术后转移及复发仍是临床上管理患者所遇到的最大挑战。因此，卵巢癌的转移及复发是临床医生和科研工作者普遍重视的问题，为研究的热点。　　越来越多的研究证明，肿瘤细胞内某些基因活性的改变在肿瘤发生、发展、侵袭和转移等病理过程中发挥着重要作用，其中肿瘤转移基因和肿瘤转移抑制基因引起学者的广泛关注和研究。MACC1作为在结肠癌中新发现的促肿瘤转移基因，在体外研究中可明显增强肿瘤细胞的化学趋向性和侵袭性，促进肿瘤细胞的迁移蠕动功能；在临床研究中发现 MACC1高表达结肠癌患者的生存期明显缩短，低表达者的5年生存率为80%，而高表达者仅为15%。作为癌基因 C-MET的关键调节因子之一，MACC1可能通过 HGF/C-MET信号通路来促进肿瘤细胞的侵袭与转移。本实验将研究 MACC1对卵巢癌恶性行为的影响和相关机制，为抑制卵巢癌侵袭转移提供新的靶点和实验依据。　　研究目的：　　利用小分子 RNA干扰技术，构建 MACC1基因瞬时沉默的人卵巢癌细胞株模型，观察卵巢癌细胞体外增殖、黏附、侵袭、转移和血管形成的变化及可能机制。　　研究方法：　　1.高表达 MACC1基因的卵巢癌细胞株的筛选　　应用 RT-qPCR及 Western blot方法检测4株不同转移潜能的卵巢癌细胞株：OVCAR3、ES-2、SKOV-3、HO-8910中 MACC1 mRNA及蛋白的表达情况。　　2. siRNA的筛选及细胞转染　　针对 MACC1基因设计并合成靶向 siRNAs,转染卵巢癌细胞 OVCAR3，沉默MACC1基因，利用 RT-qPCR及 Western blot技术检测转染 siRNA后 MACC1表达水平的变化，筛选出一条干扰效率最高的 siRNA，将此用于后续研究。　　3.沉默 MACC1基因对卵巢癌细胞侵袭转移的影响　　采用 CCK8检测细胞的体外增殖能力，采用黏附实验检测细胞黏附能力，Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力，Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力，采用血管拟态实验检测细胞的体外血管形成能力。　　4. MACC1影响卵巢癌细胞侵袭转移的机制研究　　采用 Western blot方法检测 C-MET蛋白表达的变化，构建 C-MET启动子核心区域的荧光素酶报告基因质粒 pGL3-C-MET，探讨 MACC1沉默后其活性的变化，从而研究肿瘤转移相关基因的调控机理。　　5.统计学分析　　应用 SPSS17.0统计学软件进行统计分析。计量资料以X±s表示，比较采用 t检验和方差分析，P<0.05认为差异具有统计学意义。　　结果：　　1.成功筛选出 MACC1基因高表达的人卵巢癌细胞株：OVCAR3。　　2. siRNA转染细胞后，MACC1基因表达受到不同程度的抑制，其沉默效率最高达75.73%。与阴性对照组相比，干扰组转染 MACC1-siRNA后24 h、48 h、72 h MACC1 mRNA分别下降了59.91%，75.45%，70.64%，蛋白表达水平分别下降60.22%,63.75%,54.94%。　　3. MACC1-siRNA转染卵巢癌细胞后，体外增殖、黏附、侵袭、迁移和血管形成能力均较对照组减弱，差异有统计学意义（P<0.05）。　　4. MACC1-siRNA转染人卵巢癌细胞 OVCAR3后，荧光素酶报告基因活性检测发现：其下游靶基因 C-MET启动子活性明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot结果显示：C-MET蛋白在干扰组表达下调，抑制率为41.5%，差异具有统计学意义（P<0.05）。　　结论：　　1.抑制 MACC1基因的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移和血管形成能力。　　2.通过启动子活性分析提示，抑制 MACC1表达可抑制 C-MET启动子核心区域的活性；MACC1基因沉默后，C-MET蛋白表达下调。由此推测 MACC1可能通过激活 C-MET启动子活性促进 C-MET转录及蛋白表达，从而促进卵巢癌细胞的侵袭转移。