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器官移植是众多终末期器官功能衰竭患者的唯一选择。虽然高效免疫抑制剂的应用明显提高了肝移植患者的生存率,但急性排斥反应(Acute Rejection, AR)仍然是肝移植术后最严重的并发症之一,其发生率仍然高达40%-60%,因此免疫耐受仍然是肝移植研究的重点之一。新兴的蛋白质组学是对基因组所编码的所有蛋白质进行研究的学科。通过蛋白质组学使我们对肝移植免疫耐受的发生、发展有了更详尽的理解。为了观察两种不同品系即近交系Wistar和封闭群SD大鼠原位肝移植术后的急性排斥反应及F蛋白诱导肝移植免疫耐受的情况。我们将健康雄性清洁的近交系Wistar和封闭群SD大鼠随机分为3组,A：同基因对照组：SD→SD；B：急性排斥组：Wistar→SD;C:F蛋白干预组：术前一周胸腺内注射0.4mg。采用Kamada二袖套法,建立上述Wistar和SD组合之间的肝移植模型。A、B和C组受体分别于术后3d、6d、9d及100d,四个时间点各杀死三只大鼠,收集肝组织和血清分别做相应检测,另留取部分新鲜肝组织立即置入液氮中保存备用。剩余的大鼠用于观察肝移植术后长期生存率。实验过程中共完成108例次大鼠原位肝移植(rat orthotopic liver transplantation, ROLT)操作,总的手术成功率为62.96%(68/108),其中模型训练的前期完成45例,24h成活率仅24.44%(11/45)以后随着手术技巧成熟,手术成功率逐渐达到90%以上。大鼠肝移植手术死亡的主要原因为出血、麻醉意外、无肝期太长、血栓形成等。A组同基因对照组,术后组织学检查无排斤反应表现。B组急性排斥组自术后3d开始,出现Ⅰ级排斥反应,6d以后逐渐达到高峰,大多数死于术后12-21d。C组F蛋白干预组亦未见确切排斥反应证据。结果表明：(1)二袖套法操作简便,手术成功率高,可作为肝移植实验的有效手段。(2)成功建立大鼠原位肝移植模型的关键在于完善的手术技术,主要包括高质量的供肝获取、熟练的显微血管吻合技术和尽量短的无肝期。(3)近交系Wistar和封闭群SD大鼠之间建立的原位肝移植模型,能满足急性排斥反应或免疫耐受实验研究的需要。(4)F蛋白可以诱导大鼠肝移植免疫耐受。应用超高效液相色谱串联质谱法(nanoUPLC-MS/MS)研究大鼠原位肝移植术后7天免疫耐受组和同基因对照组差异表达蛋白质的情况,对大鼠原位肝移植后的免疫耐受情况进行初步研究。建立免疫耐受组(Wistar→SD+F蛋白)n=5,建立同基因对照组(SD→SD)n=5.分别于术后7天处死5只受体,取肝组织,提取总蛋白,Trypsin酶解后,使用Waters公司独家专利MSe无标记定量技术,通过利用nanoUPLC-MS/MS技术对酶解后的肽段进行分析,数据库检索鉴定蛋白质,生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行功能分类。结果显示免疫耐受组和同基因对照组相比,两样品中同时存在的大部分蛋白上调,其中9个蛋白点表达水平明显上调,比值变化在2.59倍以上。结合数据库搜索得到鉴定,这些明显上调的蛋白的分子功能主要与细胞骨架、离子结合、氧化应激反应、能量代谢等相关。结果表明本研究建立了利用nanoUPLC-MS/MS技术对大鼠原位肝移植进行蛋白质组学分析的方法,对F蛋白诱导大鼠原位肝移植免疫耐受进行了初步研究,为建立动物模型提供量化的指标,为发现潜在的生物标记物提供方向和数据支持。