论文部分内容阅读
首先分析出发菌株谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)的生理特征,确定发酵过程中影响L-谷氨酰胺积累的重要因素,为选育工作做好准备。研究发酵液中L-谷氨酰胺的的检测方法,并利用微生物代谢控制发酵过程,详细研究L-谷氨酰胺产生菌的选育,并确定摇瓶发酵法生产L-谷氨酰胺的培养基成分,主要的研究内容和结论包括：(1)建立了一套快速准确检测L-谷氨酰胺的方法,包括纸层析法定量检测L-谷氨酰胺及高温高压酸解-酶膜联用法定量检测L-谷氨酰胺。研究纸层析测定氨基酸方法,选用纸层析作为定量检测L-谷氨酰胺的方法,并对不同展层剂的层析效果进行比较选出较优的展层剂配方(体积比)正丁醇：乙酸：水=4：1：2。对L-谷氨酰胺在酸性条件下的水解特性进行分析,确定了使用生物传感仪检测待测液在高温高压条件下酸水解前后的谷氨酸差量间接测量L-谷氨酰胺的含量,在0.15g/L-0.5g/L范围内L-谷氨酰胺的分解率可达到100%,并利用HPLC对其进行验证。(2)以一株谷氨酰胺产生菌-谷氨酸棒状杆菌(C.glutamicum SA-01)为出发菌株,采用紫外线诱变和EMS诱变相结合的方法,筛选出具有磺胺胍和NH4Cl双重抗性和遗传稳定性良好的L-谷氨酰胺高产菌。抗性突变株被命名为C.glutamicumSA-007,其谷氨酰胺产量可达13.81g/L,比出发菌株的产量(约10.64g/L)提高了29.8%,并具有良好的遗传稳定性。(3)优化种子培养基组分为(g/L)：葡萄糖30,玉米浆30,尿素6,硫酸镁0.5,KH2PO40.5;种子培养条件：pH始终保持在7.0,装液量为250mL三角瓶装20mL,温度30℃,220r/min,培养时间为12h。优化摇瓶发酵培养基组分为(g/L)：葡萄糖100.5,氯化铵46.0,玉米浆4.2,KH2PO40.5, MnSO40.01, FeSO40.02, ZnSO40.01, CaCO330;在培养条件初始pH为7.0,250mL三角瓶装20mL发酵培养基,220r/min,30℃,培养48h。产酸稳定在15.58g/L,比未经优化提高了12.8%。