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背景钙调神经蛋白抑制剂(Calcineurin inhibitors,CNI)可用于治疗激素依赖型和激素耐药型肾病综合征,其有效性已得到公认,然而随着其在难治性肾病综合征治疗中的广泛应用,相关肾毒性越来越受到人们的关注。临床上常用的钙调神经蛋白抑制主要包括环孢霉素A(Cyclosporine A,Cs A)和他克莫司(Tacrolimus,TRL,FK506),目前主要通过监测血药浓度、肾功能来反映其肾毒性,虽然肾穿刺活检仍是评价损伤的金标准,然而重复肾活检作为有创性的检测,在临床上往往难以实施。因此寻找能对CNI诱导的肾损伤高度敏感,能早期发现和诊断,并可以动态监测肾损伤进展过程的生物标志物应是解决CNI治疗难题中的关键问题。目的通过建立阿霉素诱导的肾病综合征大鼠模型,观察CNI治疗的不同时期肾损伤生物标志物包括中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)、白介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的水平变化,并以同时期肾组织病理损伤作为金标准,探讨生物标志物对CNI治疗早、中、晚期相关肾损伤评价的意义并筛选出适合于评价CNI相关肾损伤的生物学标志物。方法1.雄性SD大鼠,120~150g,共96只,随机分成2组,为对照组和实验组,其中对照组分为空白对照组和激素对照组,实验组分为激素+Cs A组和激素+FK506组,各组均给予一次性尾静脉注射盐酸阿霉素7.5mg/kg制作阿霉素肾病大鼠模型模拟儿童微小病变肾病综合征;2.各组分别予以生理盐水、泼尼松、泼尼松+Cs A和泼尼松+FK506治疗7d、14d、21d作为治疗的早期、中期和晚期,收集三个时间点的血液、尿液及肾脏组织标本;3.对采集到的血液及尿液离心取上清液,用酶联免疫吸附法检测血和尿中的NGAL、KIM-1、IL-18、TGF-α、TGF-β水平;4.对肾脏组织切片进行HE和PAS染色,光镜下观察肾脏组织病理学改变包括肾小管损伤、间质内炎细胞浸润程度以及血管病变;5.应用SPSS.22.0统计学软件,分别采用单因素方差分析、t检验及Pearson相关性分析对各组大鼠不同时期血和尿生物学标志物水平、肾组织损伤程度以及两者的相关性进行统计学分析,综合分析肾损伤生物标志物在评估CNI相关肾损伤中的价值。结果在治疗早期各组大鼠肾脏病理并未出现明显损伤,差异无统计学意义(P>0.05),到治疗中期激素对照组、激素+Cs A组和激素+FK506组大鼠均开始出现肾损伤,主要表现为肾小管上皮细胞空泡变性。血、尿生物标志物中,激素+Cs A组的u NGAL和s TGF-α水平,激素+FK506组的s NGAL、u NGAL和u IL-18水平也均开始出现变化,与激素对照组相比两者差异有统计学意义(P<0.05),而且随着治疗时间延长,s NGAL、u NGAL、s TGF-α和u IL-18的水平也逐渐升高,与7天组相比两者差异有统计学意义(P<0.05)。到治疗晚期激素+Cs A组和激素+FK506组大鼠肾损伤明显加重,除了肾小管上皮细胞空泡变性,还出现了刷状缘高柱变矮柱或是脱落,并且激素+Cs A组开始出现间质炎性细胞浸润及小动脉透明变性,肾脏损伤部位也从皮质外带逐渐扩散至内带接近髓质。血、尿生物标志物中,激素+Cs A组和激素+FK506组的血、尿TGF-β水平也开始出现变化,与激素对照组相比两者差异有统计学意义(P<0.05)。其中激素+Cs A组的s NGAL和u NGAL水平与肾小管间质损伤病理评分均呈正相关(r=0.698和r=0.731,P<0.05)。在治疗中、晚期激素+Cs A组肾小管间质损伤病理评分明显高于激素+FK506组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.本组肾损伤生物标志物中,NGAL、uIL-18和sTNF-α是评估早、中期CNI相关肾损伤较为敏感的指标,而TGF-β对于晚期CNI相关肾损伤具有更好的预警价值;2.NGAL的水平变化与CNI相关肾组织病理学损伤程度具有更好的相关性,是评价CNI相关肾损伤敏感而特异的生物标志物;尿液NGAL的无创性和易获得性值得临床推广应用,适合儿童患者;3.肾组织病理学损伤仅见于CNI治疗中、晚期,肾小管间质损伤在激素+Cs A组为弥漫性,在激素+FK506组为局灶性,Cs A相比FK506肾组织损伤程度更为严重。