【摘 要】
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赭曲霉（Aspergillus ochraceus）是引起梨果腐烂病害的常见病原真菌,可造成采后巨大的经济损失,由其产生的赭曲霉毒素A（OTA）,对人体健康也构成严重威胁。病原菌在侵染宿主过程中,会分泌效应子（effector）如酶蛋白、真菌毒素等,来帮助其入侵植物宿主。到目前为止,有关A.ochraceus中效应子的报道寥寥无几。本论文通过转录组学分析A.ochraceus在宿主诱导物培养条件下
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赭曲霉（Aspergillus ochraceus）是引起梨果腐烂病害的常见病原真菌,可造成采后巨大的经济损失,由其产生的赭曲霉毒素A（OTA）,对人体健康也构成严重威胁。病原菌在侵染宿主过程中,会分泌效应子（effector）如酶蛋白、真菌毒素等,来帮助其入侵植物宿主。到目前为止,有关A.ochraceus中效应子的报道寥寥无几。本论文通过转录组学分析A.ochraceus在宿主诱导物培养条件下产生的差异表达基因,系统挖掘A.ochraceus侵染过程中的候选效应子,筛选出侵染过程中可能的关键基因,并对其进行功能验证,揭示其在A.ochraceus侵染过程中发挥的作用,为开发新型梨果采后赭曲霉病害的防治提供科学指导依据。研究主要结果如下:（1）对在梨果汁培养基和察氏培养基中培养24 h、72 h的A.ochraceus进行高通量测序,结合信号肽扫描预测分析,共分别鉴定272个和214个上调表达的分泌蛋白编码（候选效应子）基因,主要包括糖苷水解酶、肽酶、氧化还原酶、酯酶等。（2）克隆了在梨果汁中培养24 h后显著上调表达的候选效应子AoEGH基因,该基因编码一个345 aa长度的蛋白,亚细胞定位显示AoEGH为胞外分泌蛋白,包含一个Glyco-hydro-26非保守功能结构域。（3）利用同源重组和PEG介导的原生质体转化方法,构建了AoEGH缺失突变株;与野生型相比,ΔAoEGH菌落生长和菌丝形态发生变化、孢子产量和孢子萌发率降低。（4）In vivo梨果侵染实验显示,ΔAoEGH的致病性显著降低,与野生型相比病斑直径下降83.76%;进一步的扫描电镜观察发现AoEGH参与了病原真菌早期侵染宿主植物的过程,是调控A.ochraceus在梨果伤口处侵染的关键基因。
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