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目的:
1.探索<99m>Tc直接法标记抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体(AcTnIMA)的方法,并研究标记产物的体外稳定性。
2.研究<99m>Tc-AcTnIMA在兔血内的清除规律。
3.研究<99m>Tc-AcTnlMA在正常大鼠体内的分布。
4.研究<99m>Tc-AcTnIMA在心肌损伤大鼠体内的分布,探讨<99m>TC-AcTnIMA作为心脏放射免疫显像剂的可能性。
方法:
1.用氯化亚锡(SnCl<,2>)还原法进行AcTnIMA标记,并用正交实验设计筛选抗体量、SnCl<,2>量、反应体系pH值及放射性活度四个因素的最佳组合;用纸层析法测定标记产物的标记率;用柱层析法测定标记物中<99m>Tc-AcTnIMA的纯度;将标记物在室温下放置0、2、4、6h,观察其体外稳定性。
2.分别于注射<99m>Tc-AcTnlM后0、20、40、60、90、120、150、180、240min抽取兔血样,计算ID%/g并绘制血液清除曲线,得出清除半值时间。
3.20只正常大鼠分别于注射<99m>Tc-AcTnlM后2、4、6、8h被处死(每次5只),取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺、心脏等组织,计算各组织的ID%/g。
4.将110只大鼠分为两批。第一批60只大鼠分为试验组、药物对照组和空白对照组。实验组:给20只急性心肌损伤大鼠均注射<99m>Tc-AcTnIMA 0.2mCi,每次5只于注射后2、4、6、8h处死,取血液、肝、脾、肾、正常肌肉、肺、心脏等组织,计算每克组织的放射性计数占总注入计数的百分比(ID%/g)及心.肺ID%/g比(HLR):
药物对照组:给20只急性心肌损伤大鼠均注射<99m>Tc标记的非特异性免疫球蛋白(N-IgG)0.2mCi,处死方法同实验组。取肺及心脏,计算ID%/g及HLR;空白对照组:给20只正常大鼠均注射<99m>Tc-AcTnlMA 0.2mCi,处理方法同药物对照组。第二批50只心肌损伤大鼠被随机分为10组,每组5只;心肌损伤发生后的不同时间(2、4、6、8、12、24h,3、5、10、15d)静脉注射<99m>Tc-AcTnlMA,每只大鼠的注射剂量均为0.2mCi;各组大鼠均于注射后的4h被处死,计算出各只大鼠的ID%/g及HLR。
结果:
1.<99m>TC直接法标记AcTnlMA的最佳标记条件为抗体量30μg,SnCl<,2>量80μg,反应体系pH值7,放射性活度50mCi,标记率可达99%以上;标记物中<99m>Tc-AcTnIMA的纯度较高;标记产物放置6h后,标记率仍大于95%。
2.<99m>Tc-AcTnIMA兔血清除半值时间约为60min。
3.<99m>TC-AcTnlMA在肾脏及肝脏中的分布显著高于其余脏器。
4.损伤心肌对<99m>Tc-AcTnIMA为特异性摄取,摄取高峰时间为4h:损伤心肌对<99m>Tc-AcTnIMA的摄取与损伤发生的时间无关。
结论:
1.用<99m>Tc直接法标记AcTnIMA简单高效,标记产物在体外有很好的稳定性。
2.<99m>Tc-AcTnIMA的血液清除较快。
3.<99m>TC-AcTnIMA主要通过泌尿和消化系统排泄。
4.<99m>Tc-AcTnIMA有望作为心脏放射免疫显像剂用于诊断心肌损伤。