弯曲是绵羊纤维的显著特征,羊毛弯曲的产生受多种信号分子的调控。研究表明音猬因子（Sonic hedgehog,SHH）在小鼠皮肤毛囊中的不对称表达与早期生长应答基因2（Early growth response 2,EGR2/Krox20）和胰岛素样生长因子结合蛋白5（Insulin-like growth factor binding proteins 5,IGFBP5）引起毛发弯曲模式的形成密切相关,但详细的调控机理尚不清楚。Krox20和IGFBP5对羊毛弯曲的形成有一定的促进作用,SHH参与小鼠和人等毛囊生长发育及其毛发性状的形成过程。但目前有关SHH对绵羊羊毛弯曲的作用及其机制尚不明确。本研究以美利奴羊和小尾寒羊作为试验对象,运用苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学、实时荧光定量PCR、Western blot、细胞转染和免疫共沉淀等方法探究SHH与羊毛弯曲形成的关系及其调控机制,为毛发弯曲性状形成的相关分子调控机制提供理论依据。具体如下:1.SHH参与调节不同品种绵羊背部皮肤羊毛弯曲性状利用HE染色观察美利奴羊和小尾寒羊背部皮肤的组织结构,结果显示,两种绵羊背部皮肤的组织结构存在弯曲程度及毛囊数量等差异。利用免疫组织化学、实时荧光定量PCR和Western blot等技术探究美利奴羊和小尾寒羊背部皮肤中SHH蛋白和m RNA的相对表达量差异。免疫组织化学试验结果显示,SHH蛋白在两种绵羊背部皮肤中均有表达,但存在差异;光密度分析、实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,SHH蛋白和m RNA在美利奴羊背部皮肤组织中的相对表达量均高于小尾寒羊。2.SHH调控绵羊角质形成细胞中羊毛弯曲形成相关基因体外成功分离培养绵羊原代角质形成细胞,显微镜下呈“铺路石”样。免疫荧光鉴定结果呈阳性表达。CCK8结果表明细胞生长曲线呈“S”型,符合细胞增殖趋势。过表达和沉默SHH后,利用实时荧光定量PCR技术对羊毛弯曲相关基因进行检测,结果显示过表达SHH后显著升高了KRT71、β-catenin和TCHH相对表达量。沉默SHH后显著降低了KRT71、β-catenin和TCHH相对表达量。3.SHH通过Krox20正调控IGFBP5的表达促进羊毛弯曲免疫共沉淀试验结果表明,在绵羊角质形成细胞中,SHH可以与Krox20相互作用。利用实时荧光定量PCR和Western blot检测过表达和沉默SHH对Krox20和IGFBP5的影响。结果显示,过表达SHH后显著上调Krox20和IGFBP5的相对表达量,沉默SHH后显著下调Krox20和IGFBP5的相对表达量。利用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测过表达Krox20对IGFBP5的影响,结果显示过表达Krox20后IGFBP5的相对表达量显著升高。结论:羊毛的毛囊数量及其弯曲程度因绵羊的种类不同而有所差异,这种差异在很大程度上由SHH在皮肤上的表达量有关。在此基础上,SHH可以通过Krox20正向调控IGFBP5的表达促进羊毛弯曲。