健脾疏肝方对CCl4诱导小鼠肝纤维化抑制作用的实验研究

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目的:观察中药复方健脾疏肝方对CCl4所诱导的小鼠肝纤维化的抑制作用,并探寻健脾疏肝方抑制肝纤维化的作用机制。方法:将280只雄性清洁级C57BL/6J小鼠按照随机分组表随机分为4组,即正常对照组、模型对照组、健脾疏肝组及活血化瘀组。每组各70只。于第一周实验开始前进行称重,而其后均于每周的周三下午和周日下午进行称重,并做好相关记录。通过每周动态监测每只小鼠的体重,可精确计算每只小鼠的用药剂量。提前做好用药剂量表格,以便实验进行时按照更新过的剂量给药。除正常对照组小鼠以外,分别给予模型对照组、健脾疏肝组及活血化瘀组3组小鼠腹腔注射20%CCl4橄榄油剂1ml/kg,2次/周,共持续8周。给予正常对照组小鼠腹腔注射等量的100%橄榄油剂,2次/周,共持续8周。从第5周开始,分别给予健脾疏肝组及活血化瘀组小鼠健脾疏肝方汤剂和活血化瘀方汤剂进行灌胃(1次/天,共4周)。实验于第8周末结束,再次对小鼠进行称重,并进行记录。处死小鼠的时间点包括第2周、第4周、第5周、第6周、第7周,以及第8周的周末。在第2周、第4周、第5周、第6周和第7周末从每组中分别随机处死10只小鼠。到第8周末将剩余小鼠全部处死,时间为小鼠的末次给药12小时后,禁食,不禁水。处死后检测各时间点各组小鼠肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)及四型胶原(Ⅳ-C)水平,通过光镜观察小鼠肝组织病理切片改变。结果:第8周末,模型对照组、健脾疏肝组、活血化瘀组小鼠的肝组织上清MMP-1、TIMP-1水平、血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均显著高于模型组小鼠(P<0.01);健脾疏肝组、活血化瘀组小鼠的肝组织上清TIMP-1水平、血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均显著低于模型组小鼠(P<0.01);健脾疏肝组小鼠的肝组织上清TIMP-1水平、血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均显著低于活血化瘀组小鼠(P<0.01);与空白对照组相比,模型对照组、健脾疏肝组及活血化瘀组三组小鼠的肝组织上清MMP-1水平均明显升高(P<0.01),但彼此无明显差异(P>0.05)。结论:健脾疏肝方对CCl4诱导的小鼠肝纤维化具有良好的治疗作用。健脾疏肝方通过降低TIMP-1水平抑制肝纤维化,其作用机制可能与抑制肝星状细胞HSC活化有关。
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