动物痒螨科螨虫COI、18SrRNA基因的序列分析与分子系统发生学研究

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动物痒螨病是由痒螨科(Psoroptidae)的螨类寄生于动物皮肤表面引起的一种接触性、传染性、顽固性皮肤病。该病可造成患病动物生产性能及畜产品质量下降,甚至导致动物死亡。对动物痒螨科虫株进行准确的分类鉴定,是开展痒螨生物学、免疫学及防治等研究的基础性工作。传统的形态与生物学分类方法在近缘种或中间种的分类鉴定、宿主及地理环境等因素导致虫株的表形变异等方面存在局限性,而应用DNA序列分析技术进行的分类学研究可弥补传统分类方法的缺陷。应用线粒体基因对痒螨科螨类进行的分类与系统发生研究,目前尚未见报道。本研究应用PCR方法扩增分别采自四川兔和水牛的兔痒螨(Psoroptes cuniculi)和水牛痒螨(Psoroptes natalensis),采自四川黄牛、3个品种奶牛(黑白花奶牛、西门塔尔奶牛和蒙贝利亚奶牛)的德州足螨(Chorioptes texanus)和采自大熊猫的熊猫足螨(Chorioptes panda)的线粒体COI和核糖体18SrRNA基因序列,探讨动物痒螨科螨类的亲缘关系及分类地位,从分子水平上为以形态学与生物学分类为基础的传统分类系统提供佐证。本研究成功扩增出了7个动物痒螨科螨虫分离株(采自四川兔的兔痒螨和水牛的水牛痒螨,采自四川黄牛、3个品种奶牛的德州足螨和采自大熊猫的熊猫足螨)的COI基因部分序列,其长度分别为633bp、632bp、632bp、630bp、631bp、632bp和633bp。同源性分析结果显示:7个螨虫分离株COI基因序列中4个分离自牛的德州足螨之间同源性很高(98.9%~100%),它们与熊猫足螨分离株之间的同源性较低(为87.7%~88.2%)。兔痒螨和水牛痒螨的同源性较低(84.8%)。同时,本研究还成功扩增出了7个螨虫分离株(采自四川兔的兔痒螨和水牛的水牛痒螨、采自四川黄牛和3个品种奶牛的德州足螨和采自大熊猫的熊猫足螨)的18SrRNA基因部分序列,其长度分别为915bp、918bp、918bp、917bp、918bp、918bp和917bp。同源性分析结果显示:7个螨虫分离株18SrRNA基因序列中,4个分离自牛的德州足螨之间同源性很高(99.7%~100%),它们与熊猫足螨分离株的同源性较低(93.2%),兔痒螨分离株和水牛痒螨分离株的同源性为97.6%。在GenBank中搜索筛选出10个螨虫分离株的COI基因序列和15个螨虫分离株的18SrRNA基因,结合本研究测定的序列分别构建系统发育树(MA、NJ、ME和MP树)。结果显示:基于COI序列和18SrRNA序列所构建的几种系统发育树的拓扑结构基本相同,兔痒螨和水牛痒螨处在系统树的同一分支构成“姊妹种”;4个分离自牛的德州足螨始终聚在一起,与熊猫足螨处在同一大的分支构成“姊妹种”。本研究中基于COI基因和18SrRNA基因的序列分析和系统树构建结果,均支持传统分类学把兔痒螨和水牛痒螨分为不同的种,分离自黄牛和3个品种奶牛的德州足螨与大熊猫足螨应为不同种的分类方法。
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