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研究背景与目的慢加急性乙型肝炎肝衰竭(acute-on-chronic hepatitis B liver failure, ACHBLF)死亡率高,严重危害人类健康。目前普遍认为,炎症在ACHBLF的发病机制中起着重要作用。近期的研究表明,wnt信号通路与炎症密切相关。所以,本研究旨在通过检测wnt信号通路中某些分子表达的变化,来寻找能有效判断ACHBLF预后的生物标志物。研究方法本实验总共纳入了153例研究对象,其中包括63例ACHBLF患者,60例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者,和30例健康对照者(health controls, HCs)。用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR)法检测每个研究对象的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中wnt5a, wnt3a, lefl, tcfl, fzd5和sfrp1的mRNA水平；用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR, MSP)检测每个研究对象的sfrp 1基因启动子的甲基化状态；用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测每个研究对象血清中wnt5a和sfrp1的水平。我们采用SPSS16.0软件进行统计学分析,数据资料用中位数(下四分位数,上四分位数)或数字表示,组间差异采用独立样本t检验,Mann-Whitney U检验或卡方检验比较,血清wnt5a与临床指标之间相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异具有统计学意义。结果1. ACHBLF患者组与CHB患者组相比较,ACHBLF患者的wnt5a mRNA水平明显高于CHB患者(P=0.010)；ACHBLF患者组与HCs组相比较,ACHBLF患者的wnt5a mRNA水平明显高于HCs(P<0.001); CHB患者组与HCs组相比较,CHB患者wnt5a mRNA水平明显高于HCs(P=0.037)。2. ACHBLF患者组与CHB患者组相比较,ACHBLF患者血清wnt5a浓度是1.59(1.43-3.22)ng/ml,明显高于CHB患者[1.47 (1.42-1.54) ng/ml, P=0.046]; ACHBLF患者组与HCs组相比较,ACHBLF患者的血清wnt5a浓度也明显高于HCs [1.44(1.41-1.48)ng/ml, P=0.023]; CHB患者组与HCs组相比较,两组血清wnt5a浓度无明显差异(P=0.259)。3. ACHBLF患者血清wnt5a水平与总胆红素(total bilirubin, TBIL) (rs=0.277, P=0.028),肌酐(creatinine, Cr) (rs=0.312, P=0.013)和终末期肝病模型(model for end-stage liver diseases, MELD)评分(rs=0.444,P<0.001)呈正相关,而与谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT) (rs=-0.27, P=0.032)和白蛋白(albumin, ALB) (rs=-0.254,P=0.044)呈负相关。血清wnt5a水平与其他一些指标如乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AS T)、凝血酶原时间国际标准化比值(international normalized ratio, INR)和凝血酶原活动度(prothrombin time activity, PTA)则没有明显相关性。4.当血清wnt5a浓度的截断值定义为1.553ng/ml时,在判断ACHBLF患者的预后时的敏感性是69.23%,特异性是83.33%,阳性预测值是87.1%,阴性预测值是62.5%,受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic, ROC)下面积是0.847(95% CI：0.734-0.925)；当ACHBLF患者wnt5a的浓度超过1.553ng/ml时, 其生存时间是26.594±5.267(95% CI:16.271-36.916)天,明显低于血清wnt5a浓度小于1.553ng/ml的ACHBLF患者[65.032±5.901(95% CI：53.467-76.598)天,P<0.001]。5. ACHBLF患者组与CHB患者组、HCs组相比较,ACHBLF患者的sfrp1基因的启动子甲基化水平(22/63,34.9%)明显低于CHB患者(37/60,61.7%；P=0.003),但明显高于HCs(2/30,6.7%;P<0.001);ACHBLF患者的sfrp1 mRNA水平高于CHB患者(P=0.019),但低于HCs (P=0.010); ACHBLF患者的血清sfrp1水平[0.90(0.57-1.58) ng/ml]高于CHB患者[0.56(0.48-0.74)ng/ml, P<0.001],但与HCs[0.73(0.50-1.45)ng/ml, P=0.435]没有统计学差异。结论1. ACHBLF患者血清wnt5a浓度显著升高,且ACHBLF患者死亡组血清wnt5a浓度明显高于生存组。这提示血清wnt5a可能作为有效预测ACHBLF患者3个月预后的生物标志物。2. ACHBLF患者中wnt5a、sfrp1的表达发生了改变,这说明wnt5a和sfrp1可能参与了ACHBLF疾病的发生发展。