目的 构建含刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)表膜蛋白P30基因的表达载体，在大肠杆菌中诱导表达，纯化表达产物P30并进行抗原性分析，研究P30在弓形虫病血清学诊断中的应用价值。 方法 (1)P30蛋白的表达、纯化与复性 巨噬细胞培养弓形虫，提取弓形虫DNA为模板，PCR扩增目的片断，将目的片断克隆至pUCm-T Vector，酶切和PCR鉴定，再亚克隆到原核表达载体pET28b(+)中、构建重组质粒pET28b(+)／P30，经酶切、PCR及测序鉴定后转化至表达宿主菌BL21(DE3)中诱导表达，SDS-PAGE和Western-Blot鉴定表达产物；包涵体经8M尿素变性，Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，变性蛋白经稀释透析复性，SDS-PAGE和Western-Blot分析和鉴定复性P30蛋白，BCA法测定复性蛋白浓度，用于ELISA包板。(2)小鼠弓形虫抗血清的制备及临床弓形虫病患者阳性血清的收集 弓形虫速殖子经-80℃反复冷冻3次，经减毒后感染昆明小鼠，制备小鼠弓形虫阳性血清，收集临床弓形虫病人血清。(3)弓形虫病人IgG抗体ELISA检测方法的建立以纯化复性后的P30包板，间接ELISA检测临床弓形虫病人血清中抗弓形虫的抗体，以小鼠弓形虫阳性血清为对照，同时与国外进口试剂盒的检测结果比较，评价纯化的P30在弓形虫病血清学诊断中的应用价值。 结果 PCR扩增得到长800bp的目的片断，测序结果与Genbank上登录序列一致；含pET28b(+)／P30重组菌经IPTG诱导，SDS-PAGE电泳结果显示，得到一分子量(M_r)约30 kDa的重组蛋白，目的蛋白在菌体细胞内以包涵体形式存在；8M尿素溶解后经Ni-NTA亲和柱纯化获得了纯度大于95％的重组蛋白；