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研究目的:1.应用新型RNA scope技术检测高危型HPV E6/E7 mRNA在宫颈鳞状上皮内病变组织中的表达,探讨RNA原位杂交技术在宫颈病变中的诊断意义。2.分析高危型HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测与HPV DNA分型检测在宫颈癌前病变中的一致性,及其在宫颈癌前病变诊断中的价值。3.分析高危型HPV E6/E7 mRNA原位杂交与P16蛋白表达在宫颈病变中的关系,探讨二者在宫颈癌筛查中的分流作用。材料和方法:1.收集解放军总医院病理科2016年1月至2017年12月期间宫颈活检或锥形切除的宫颈组织258例,包括病理诊断为高级别和低级别鳞状上皮内病变(SIL)/宫颈鳞状上皮内瘤变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ以及CINⅡ～Ⅲ)的病例(实验组),以及活检诊断为炎症的病例(对照组)。2.复阅切片并采用新的LAST(lower anogenital squamous terminology project)两级分类方法进行重新诊断入组,其中炎症组33例、LSIL组110例、HSIL组115例。3.所有入组病例进行:1)免疫组化方法检测p16在不同组别中的表达差异。2)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测并分析结果。3)查阅入组病例术前或活检前HPV DNA分型检测结果。统计学分析:1.采用SPSS22.0统计软件包进行处理,计数资料采用卡方检验。p<0.05为差异有统计学意义。2.ROC曲线评价统计量计算:ROC曲线下的面积值在1.0和0.5之间。在AUC>0.5的情况下,AUC越接近于1,说明诊断效果越好。3.Kappa检验:计算结果为-1～1,结果越接近于1,说明一致性越好。结果:1.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测组间年龄分布情况及统计结果:1)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测在各年龄段表达情况及统计结果:在258例宫颈活检组织样本中,最小年龄19岁,最大年龄74岁,平均年龄40岁,中位年龄38岁;各组别平均年龄分别为炎症组42.33±10.08岁、LSIL40.15±11.36岁、HSIL40.06±10.52岁,组间年龄比较使用方差分析,各组间年龄无统计学差异(p=0.5442)。将所有病例按照 ≤30岁、31～40、41～50、51～60、61～70、≥71岁进行分组,则在≤30岁组的HR HPV E6/E7 mRNA阳性率为最高84.62%(44/52)。2)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交阳性结果在不同病变分组的表达方式:在258例入组样本中,HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交总体阳性率为79.46%(205/258);在各组别中表达情况分别为炎症组45.45%(15/33)、LSIL70.91%(78/110)、HSIL97.39%(112/115);各组间差异有显著统计学差异(χ2=50.960,p<0.001)。73%(11/15)的炎症组阳性表达以散在少数的颗粒状信号点表达在浅表层上皮;44%(33/75)LSIL的阳性表达主要表现为定位在表皮上层的弥漫性核染色,多见斑簇状的阳性信号且主要集中于表皮上1/2;83%(84/101)的HSIL组阳性表达为散在或弥漫全层的信号。经卡方检验,HPVE6/E7 mRNA原位杂交阳性表达方式在各组间有显著统计学差异(χ295.408,p<0.0001。随着病变程度的增加,HR HPV E6/E7 mRNA阳性表达从浅表层到深层逐渐深入。2.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测与HPV DNA检测结果的比较:1)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与HPV DNA检测的一致性:经kappa检验可知HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与HPV DNA在对HSIL的检测的一致性较高,kappa=0.796。2)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与HPV DNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的比较:应用ROC曲线验证二者对于宫颈鳞状上皮内病变的敏感性和特异性。经检验可知HR HPV DNA检测与HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交鉴别炎症和LSIL的ROC曲线下面积分别为0.584(95%CI 0.464-0.705,p=0.147)和0.726(95%CI 0.640-0.812,p<0.001);HR HPV DNA检测与HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交鉴别LSIL和HSIL的ROC曲线下面积分别为0.500(95%CI 0.424-0.577,p=0.990)和0.716(95%CI 0.647-0.784,p<0.001)。3.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测与p16蛋白表达的关系。1)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与p16蛋白表达的一致性:经kappa检验可知HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与p16检测对癌前病变诊断的kappa=0.550。2)HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与p16蛋白检测对鉴别宫颈鳞状上皮内病变的敏感性及特异性比较:统计并分析HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与p16蛋白表达在LSIL组和HSIL组的表达情况并运用ROC曲线图验证二者对于鉴别宫颈鳞状上皮内病变的敏感性和特异性。经检验结果可知,HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交鉴别LSIL和HSIL的ROC曲线下面积为0.718(95%CI 0.650-0.786,p<0.001),p16蛋白检测鉴别LSIL和HSIL的ROC曲线下面积为0.835(95%CI 0.778-0.892,p<0.001).结论:1.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交阳性率随着宫颈病变级别升高而增高,证实HR HPV E6/E7 mRNA的结果对诊断和区分宫颈病变程度具有价值,可以为宫颈癌前病变的分流提供更多证据。2.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交阳性表达方式随着宫颈癌前病变严重程度不同呈现出从浅表层到深层不同类型的表达模式,提示HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交可以反应HR HPV病毒在宿主体内的状态。3.HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交与HPV DNA检测在HSIL中一致性最高,HPV DNA检测对炎症和LSIL的敏感性高,HR HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测对LSIL和HSIL的特异性更好。4.HRHPVE6/E7 mRNA原位杂交相较于p16蛋白检测,可以更早反应HRHPV病毒与宿主细胞的整合状态,而p16蛋白检测对于鉴别LSIL和HSIL具有更好的诊断价值,关注和随访二者表达不一致结果的患者,有助于提高筛查效果并有早期提示作用。