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奶牛乳腺是乳汁合成及分泌的重要器官,乳腺的发育和泌乳功能调控与细胞结合和连接关系密切,其中钙粘连蛋白(E-cadherin)作为细胞连接和信号转导中的重要因子,在乳腺发育及泌乳过程中发挥一定的作用。但目前对乳腺早期发育结构形成及相关信号转导途径的研究尚未全面进行。本研究目的在正确了解乳腺结构功能基础上,通过分子生物学手段揭示乳腺发育、泌乳及退化过程中E-cadherin的分子机理和信号转导机制,为构建乳腺发育和泌乳调控网络提供有用信息。本研究以荷斯坦奶牛为实验对象,应用免疫荧光三重标记染色、荧光定量RT-PCR以及Western blotting技术,检测不同发育时期奶牛乳腺组织中E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1的定位定量表达；以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞系为模型,添加王不留行和蒲公英中药有效成分,应用荧光定量RT-PCR和Western blotting方法,检测王不留行和蒲公英对乳腺上皮细胞粘附分子表达的影响：使用RNA干扰技术沉寂Beta-catenin基因,检测Wnt信号通路中E-cadherin和Cyclin D1表达变化以及对细胞增殖生长的影响。研究结果表明,E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1在奶牛乳腺发育的不同时期均有表达,但不同时期的组织表达量差异显著(P<0.05)。采用组织块培养法成功获取的奶牛乳腺上皮细胞系,添加王不留行和蒲公英有效成分提取物处理细胞后,荧光定量RT-PCR结果表明,处理组的E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1mRNA表达量均高于对照组(P<0.05)与Western blotting结果一致。利用siRNA干扰技术,成功建立了Beta-catenin基因沉寂细胞模型；荧光定量RT-PCR和Western blotting检测表明,Beta-catenin基因沉寂后,E-cadherin mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),而Cyclin D1mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05),促进奶牛乳腺上皮细胞增殖。在奶牛乳腺发育的不同时期,E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1的表达均发生了显著变化,提示与奶牛乳腺发育过程关系密切；添加王不留行和蒲公英中药有效成分可使奶牛乳腺上皮细胞中E-cadherin、Beta-catenin和Cyclin D1表达量增加,促进细胞增殖；而当Beta-catenin基因沉寂后,Cyclin D1蛋白表达量显著增高,促进奶牛乳腺上皮细胞增殖,提示Beta-catenin表达在Wnt信号通路调控乳腺上皮细胞增殖中具有重要作用。