壬基酚（nonylphenol,NP）是环境内分泌干扰物质中具有代表性的物质,且化学性质比较稳定,易富集于沉积物中,不易降解,暴露到环境中可导致生物与人体的性激素分泌量及活性下降,精子数量减少,生殖器官异常,癌症等疾病的发病率增加,并使生殖能力降低,后代的健康与成活率下降,同时还可能影响到各种生物的免疫系统和神经系统,也可能导致生物基因突变等。目前壬基酚的检测方法主要有气相色谱法、气相色谱一质谱法联用和高效液相色谱法、液相色谱-质谱法,后来又发展成固相萃取、吹扫捕集与气相色谱法联用,免疫分析方法和化学发光法偶有报道。用色谱法不仅昂贵费时,而且分析过程繁琐冗长。近年来,随着生物技术的发展产生了许多壬基酚的生物检测方法。生物检测中,PCR检测技术由于其灵敏度高,检测限更低,受到了广泛关注。SYBR GreenⅠ荧光定量PCR是近年来出现的具有高灵敏度的定量PCR方法。目前,在壬基酚检测领域,PCR技术主要应用检测壬基酚的雌激素效应,直接用于检测环境样本中壬基酚的含量的研究报导较少。本文采用体外DNA结合实验,结合外切酶消解与荧光定量PCR技术,建立一种壬基酚的荧光定量PCR检测新方法。壬基酚可以活化雌激素受体,使之与包含特定序列的双链DNA结合,结合的DNA因受到蛋白质的保护可抵抗核酸外切酶ExonucleaseⅢ的消解而被保留下来,痕量的保留DNA可通过PCR扩增出来。根据此原理,本研究首先从鱼肝脏中提取含雌激素受体的细胞溶质,与不同浓度的壬基酚结合使雌激素受体活化,形成受体-配体复合物。再设计合成特异性引物序列,采用常规PCR方法扩增制备双链结合DNA;使双链结合DNA与受体-配体复合物反应结合后,用核酸外切酶和S1酶消解,去除未受到蛋白质保护的结合DNA。将消解后产物作为模板,进行荧光定量PCR扩增反应,从而建立Ct值与壬基酚浓度的标准曲线。同时探索最优反应条件,并确定荧光定量PCR的最低检测限及其结果的重复性。将该方法用于检测实际环境样品中壬基酚的含量,并将检测结果同高效液相色谱法进行比较,比较两种检测方法的不同。本课题主要试验结果表明:（1）壬基酚暴露条件下,鱼体内可产生较多的雌激素受体;实验中采用羟基磷灰石微量法,将配体受体复合物纯化,效果显著,可减少PCR实验中的非特异性扩增。采用SPR定性鉴定受体-配体复合效果,在加入壬基酚标准溶液浓度为10^-8-10^-2g/L范围内,壬基酚配体浓度与受体-配体复合物的SPR响应强度之间呈线性关系。（2）以已知拷贝数的DNA做定量标准曲线,之后根据标准曲线,及不同浓度壬基酚对应的模板拷贝数,得到壬基酚浓度与Ct的关系曲线,为:Ct=-1.828×log（壬基酚浓度）+11.447。分析可知,壬基酚浓度为10^-8-10^-2mol/L时,线性关系显著（R²=0.99523）。确定本实验建立的荧光定量PCR法对壬基酚的最低检测限为10^-8mol/L。（3）高效液相色谱法检测壬基酚及与PCR方法的比较:论文建立了高效液相色谱法的标准直线,考察了方法的检测限并应用于实际环境样品的检测,结果令人满意。并将该方法的各项指标与本论文首次建立的荧光定量PCR分析方法进行比较,就其优缺点进行了讨论。本试验建立的荧光定量PCR方法检测壬基酚,具有检出限低,重现性好,可同时处理大批量样本等优点。本研究将改进的酶切保护反应与PCR技术结合起来,建立了一种新的壬基酚检测方法,该方法灵敏度极高,操作简便,可作为一种有效的痕量壬基酚生物筛选及定量检测方法。