来自小鼠胚胎干细胞的CD71high群体的鉴定及体外脱核研究

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基于本实验室以前的结果,我们通过分析原始红细胞(Primitive Erythrocytes, EryPs)和永久红细胞(Definitive Erythrocytes, EryDs)中差异表达基因进一步确认小鼠胚胎干细胞(mouse Embryonic Stem cells, mESCs)体外拟胚体(Embryoid Body, EB)发育过程中出现的高表达CD71的细胞群体(CD71high)类似于小鼠胚胎8.5天卵黄囊来源的EryPs。此外该mESCs-EB系统可以用于筛选在EryPs中起作用的基因,我们发现Eaf1的敲除会大幅降低CD71high群体比例,real-time-PCR结果显示胚胎血红素βH-和εy-globin表达降低,而巨核细胞的基因几乎没什么变化,而Eaf1在小鼠造血系统中的作用鲜有报道,仅有Eaf1在斑马鱼造血系统中的研究,我们的结果从而提示Eaf1可能在哺乳动物造血中起重要作用。此外,在氧胁迫情况下保护EryDs的miR144/451对CD71high群体比例没有影响,说明该microRNA在EryPs和EryDs中的功能可能有所不同。利用EB微环境,CD71high群体可以体外成熟脱核,脱核比例约2%。之前有报道EryPs的脱核需要巨噬细胞的协助,通过M-CSF可以成功从骨髓细胞中诱导得到纯度约98%的巨噬细胞,然后与CD71high群体共培养,结果显示CD71high群体可以成熟脱核,比例提高至10%。总之,mESCs-EB系统中出现的CD71high群体为研究EryPs发生发育的内在分子机制提供了一个模型和方法,克服了之前EryPs难获得及数量少的困难。
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