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混合胶束比单一胶束的载药量更高及稳定性更好等。聚乙二醇1000维生素E 琥珀酸酯(tocopheryl polyethylene glycol inate,TPGS)为美国 FDA 批准的聚合物,在药物载体中的应用越来越广泛,可提高药物胞内摄取率和体内外治疗效果。课题组前期已合成了叶酸修饰硬脂酸-白芨多糖两亲聚合物(FA-BSP-SA),其在水性环境中可自组装成纳米胶束,可靶向递放肿瘤药物从而提高抗肿瘤效果。本研究通过考察TPGS的加入对FA-BSP-SA胶束理化性质、载药、体外抗肿瘤作用及药代动力学的影响,探讨FA-BSP-SA与TPGS联合使用作为抗肿瘤药靶向递送载体的可行性。以采用透析法制备胶束,并考察TPGS加入对FA-BSP-SA水性环境中自发聚集行为的影响。利用电荷静电作用制备阿霉素-胆酸盐复合物直接包载入胶束中。考察了 TPGS的加入对FA-BSP-SA胶束粒径、载药量及包封率等的影响。对比不同TPGS加入量和不同胶束浓度对胶束载药量和药物包封率的影响。考察勒不同pH值时,胶束形态、粒径及体外释药行为。测定了游离阿霉素、载阿霉素FA-BSP-SA胶束和载阿霉素FA-BSP-SA/TPGS混合胶束体内血药浓度,对比了主要药代动力学参数差异。利用MTT法和溶血实验考察FA-BSP-SA/TPGS混合胶束的安全性。以MTT法测定了 Dox@FA-BSP-SA胶束对4T1细胞存活率的抑制,并采用荧光酶标仪观察了 Dox@FA-BSP-SA胶束在4T1肿瘤细胞内摄取。聚集实验结果表明,TPGS加入可改变FA-BSP-SA聚集性能。TPGS加入质量百分比为0%,12.5%,25%、50%,75%及100%时,胶束CAC值分别为5.40、25.64、15.0、6.38、2.62 和 36.2μg/mL。加入 TPGS 质量百分比为 50%时,FA-BSP-SA/TPGS 的 CAC值为 6.38μg/mL,与 FA-BSP-SA 的 CAC值(5.40 μg/mL)相近。胶束浓度相同,载药后质量比为1:1和3:1(FA-BSP-SA:TPGS)混合胶束粒径相对于空白胶束小,但质量比1:3(FA-BSP-SA:TPGS)的混合胶束粒径较载药前大,可能与TPGS水溶性强,CAC聚集性低有关。电位无明显变化。当二者质量分别1:3、1:1和3:1(FA-BSP-SA:TPGS),空白胶束浓度为1.0、1.0和0.5 mg/mL时,胶束粒径较小,但载药后较小胶束粒径的胶束浓度分别为1.0、0.5和1.0 mg/mL。TPGS加入影响FA-BSP-SA载药量和包封率。胶束浓度为0.5 mg/mL FA-BSP-SA/TPGS1000(质量比为3:1)Zeta电位约为-15 mV,平均粒径小于160 nm,包封率为91.9%,载药量为14.4%。根据胶束CAC值、粒径、载药量、包封率等综合考虑,确定以质量比为3:1的FA-BSP-SA/TPGS混合胶束进行深入研究。体外释放实验结果表明,pH值不会影响游离阿霉素的释放,但pH值低的酸性环境中,胶束释药速率随却明显加快,表明胶束中药物的释放具有一定的pH敏感性。Dox@FA-BSP-SA/TPGS体外释放符合扩散和骨架溶蚀的混合机制。体内药动学研究结果表明,游离阿霉素、Dox@FA-BSP-SA胶束和Dox@FA-BSP-SA/TPGS 混合胶束的 AUC0-∞ 分别为 12.87±2.26 mg.h/L、64.38±8.45mg.h/L 和 65.20± 8.32mg.h/L。Dox@FA-BSP-SA 单一胶束及Dox@FA-BSP-SA/TPGS混合胶束的消除半衰期t1/2分别为2.93±0.82和2.414±0.96h,是游离阿霉素t1/2(0.65±0.19h)的4倍左右平均滞留时间MRT0.∞分别为2.97±0.22h和2.648±0.29h,是游离阿霉素(0.73±0.14h)的4倍左右;而胶束的血浆清除率C1仅为游离药物的1/5。以上结果证实,当Dox分别包裹入FA-BSP-SA和FA-BSP-SA/TPGS胶束后,能延长阿霉素体内的循环时间,增加体内滞留时间,从而促进阿霉素的体内利用率。MTT测定和溶血性实验结果表明,FA-BSP-SA和FA-BSP-SA/TPGS安全性良好。胶束浓度0.25～1.0 mg/mL范围内,FA-BSP-SA和FA-BSP-SA/TPGS混合胶束的溶血率小于5%,具有良好的生物安全性。阿霉素浓度为0.2-1.0μg/mL时,随药物浓度增加,4 T1细胞存活率降低。阿霉素浓度为0.5-1.0μg/mL的Dox@FA-BSP-SA胶束与Dox@FA-BSP-SA/TPGS混合胶束细胞存活率均极其显著低于游离阿霉素组细胞存活率(***p<0.001)。阿霉素浓度1.0μg/mL的游离阿霉素、Dox/BSP-SA胶束和Dox@FA-BSP-SA/TPGS胶束孵育的4T1细胞存活率分别为55.62%,37.82%和25.88%。结果表明,FA-BSP-SA与TPGS制成混合胶束,阿霉素对肿瘤细胞的抑制作用显著增强。TPGS加入可增加Dox@FA-BSP-SA胶束中阿霉素胞内摄取。随浓度增加和孵育时间延长,游离阿霉素、Dox@FA-BSP-SA和Dox@FA-BSP-SA/TPGS中阿霉素胞内摄取率均呈剂量依赖性增加现象。胞内摄取顺序:Dox@FA-BSP-SA/TPGS>Dox@FA-BSP-SA>free doxorubicin(*p<0.05,**p<0.01 or ***p<0.001)。说明 TPGS 加入可增强对4T1肿瘤细胞的抑制作用。