【摘 要】
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目的:骨关节炎中关节软骨的进行性退变是其的主要原因,在关节软骨中Cx43表达上调,研究显示Cx43在滑膜细胞中影响着MMPs的分泌水平。本实验拟通过siRNA转染靶向抑制Cx43的表达
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目的:骨关节炎中关节软骨的进行性退变是其的主要原因,在关节软骨中Cx43表达上调,研究显示Cx43在滑膜细胞中影响着MMPs的分泌水平。本实验拟通过siRNA转染靶向抑制Cx43的表达,检测并探讨其对体外培养的人骨关节炎软骨细胞MMP-1、13的分泌水平的影响。方法:取接受全膝关节置换手术的骨关节炎患者的废弃关节软骨,采用酶消化法获得骨关节炎软骨细胞用于体外培养。待细胞长满90%后接种于6孔板,通过软骨细胞特异表达的Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学法鉴定软骨细胞;并用商业合成的Cx43 siRNA进行转染,通过RT-PCR检测筛选出抑制效率最高的siRNA之后,对转染效率最高的组提取总RNA和总蛋白,分别采用RT-PCR和Western-Blot检测MMP-1及MMP-13的mRNA和蛋白表达水平,采用独立样本T检验统计得到的计量资料。结果:1.与人正常成纤维细胞的阴性对照组相比,Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学实验结果显示人骨关节炎软骨细胞呈弱阳性。2.Cx43 siRNA序列筛选结果显示GJA1-3抑制效率最高。3.siRNA转染48小时后采用RT-PCR检测,结果显示与阴性对照组相比,实验组MMP-1、13的mRNA表达下降,具有统计学意义(P<0.05)。4.Western-Blot结果显示实验组MMP-1、13的蛋白水平下降,具有统计学意义(P<0.05)。结论:本次实验结果显示siRNA抑制Cx43表达后,可以降低体外培养的人骨关节炎软骨细胞MMP-1、13转录水平的mRNA和蛋白水平。说明Cx43及其组成的缝隙连接通道可能是通过影响蛋白水解酶MMPs来影响OA的发生和发展过程的。
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