【摘 要】
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猪干扰素-γ(PoIFN-γ)是由激活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子,它具有高效抗病毒和免疫调节作用,有广阔的应用前景。为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素-γ
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猪干扰素-γ(PoIFN-γ)是由激活的T细胞和NK细胞产生的一类细胞因子,它具有高效抗病毒和免疫调节作用,有广阔的应用前景。为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素-γ制剂,本研究将去除信号肽的猪干扰素-γ cDNA基因置于酿酒酵母α因子分泌信号的DNA序列后,构建成能精确分泌表达PoIFN-γ蛋白的重组表达载体pPIC9K-α-PoIFN-γ,通过电转化导入毕赤酵母GS115中,采用G418进行筛选,获得了两株能够高效分泌表达PoIFN-Y的多拷贝插入重组子。提取重组子的基因组DNA,采用PCR方法对重组子进行鉴定,结果表明PoIFN-γ成熟多肽基因成功整合到宿主菌的基因组中。重组子经甲醇诱导表达96h后,离心培养物,取上清用75%硫酸铵4℃沉淀过夜,再用PBS(pH7.4)透析24h,然后进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明所获得的两株重组子都能分泌表达出17kD和23kD左右的PoIFN-γ特异蛋白,表达量分别为105mg/L和108mg/L,约占培养液总蛋白的60%。采用PK-15/HCV系统对其中一株重组子的分泌表达产物进行抗病毒活性研究,结果表明所获得的重组PoIFN-γ能够很好地保护猪肾细胞(PK-15株)免受猪瘟病毒HCV(石门系)的感染。 本研究首次在毕赤酵母表达系统中以分泌形式表达出重组PoIFN-γ,为利用基因工程手段开发重组猪干扰素-γ制剂打下了良好的基础。
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