目的：　　 对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）在体外用apelin进行刺激，研究apelin对人脐静脉内皮细胞增殖的影响以及apelin-APJ系统与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）等血管生成相关因子之间可能的相互作用。　　 方法：　　 1.人脐静脉内皮细胞体外培养及处理：采用DMEM培养基（含有10％胎牛血清）于37℃，5％CO2培养箱中常规培养人脐静脉内皮细胞，并根据实验需要加入apelin、PI3K抑制剂进行干预。在细胞培养过程中用倒置显微镜观察细胞生长状态。　　 2.细胞中VEGF、FGF等血管生成相关性因子表达的测定：培养细胞，并加入不同浓度的apelin作用不同时间，收集培养后72h的细胞，应用逆转录-聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法，检测人脐静脉内皮细胞中VEGF、FGF等血管生成相关性因子mRNA表达的变化。　　 3.四甲基偶氧唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖情况：按常规方法培养人脐静脉内皮细胞，以1000个/孔的密度接种至96孔板，根据不同的刺激条件分组如下：①空白对照组；②实验对照组：③apelin组；④PI3K抑制剂组；⑤apelin+PI3K抑制剂组。48h后用MTT法检测各组细胞OD值。　　 4.细胞FGFR1蛋白的检测：按照常规方法培养人脐静脉内皮细胞，根据不同的刺激条件分组：实验对照组、10-7M apelin组、25 uM PI3K抑制剂组和10-7M apelin+25 uM PI3K抑制剂组。24 h后用蛋白免疫印迹（Westernblotting）法检测FGFR1蛋白的表达变化。　　 结果：　　 1.倒置显微镜观察人脐静脉内皮细胞生长状态良好，镶嵌排列呈“铺路石”样，细胞较大，呈多角形，无重叠生长现象。　　 2.RT-PCR检测发现，VEGF、FGF等血管相关性因子在人脐静脉内皮中均有表达，且表达水平有时间、浓度依赖性，不同浓度的apelin刺激人脐静脉内皮细胞，1h时各目的基因的表达量变化不大，而4h和8h时随浓度的升高而有所增强或减弱，且4h、8h表达量差别不大。其中APJ、VEGF、bFGF、FGFR1和MMP2/9 mRNA表达水平随apelin浓度的升高而增加（P<0.05或P<0.01）：TIMPs能调节MMPs的活动，经apelin刺激后，TIMP1/2mRNA表达水平随apelin浓度的升高而减少（P<0.05或P<0.01）。　　 3.MTT检测结果显示：①apelin刺激能诱导人脐静脉内皮细胞明显增殖（P<0.01），PI3K抑制剂能抑制人脐静脉内皮细胞增殖（P<0.05），但apelin和PI3K抑制剂之间没有交互作用（P>0.05）；②对照组、apelin组、PI3K抑制剂组和apelin+PI3K抑制剂组各组之间OD值两两比较均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。　　 4.Western blotting检测结果显示：①apelin刺激能诱导人脐静脉内皮细胞FGFR1蛋白表达的明显增加（P<0.01），PI3K抑制剂可使人脐静脉内皮细胞FGFR1蛋白表达减少（P<0.05），但apelin和PI3K抑制剂之间没有交互作用（P>0.05）：②对照组、apelin组、PI3K抑制剂组和apelin+PI3K抑制剂组各组之间FGFR1蛋白表达两两比较均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。　　 结论　　 Apelin作用于HUVECs，能够促HUVECs增殖，上调APJ、VEGF、bFGF、FGFR1和MMP2/9 mRNA表达，下调TIMP1/2 mRNA表达，而且在蛋白水平上，能上调FGFR1蛋白的表达。　　 本实验在体外用apelin刺激HUVECs，从核糖核酸水平、蛋白水平和功能上检测apelin对HUVECs增殖的影响，验证了apelin-APJ系统与VEGF、FGF等血管生成相关性因子之间的相互作用关系，并且证明了apelin-APJ系统除通过PI3K/akt通路发挥作用外，还可能通过其它多种途径发挥作用。本研究为进一步阐述apelin-APJ系统对血管生成的作用及可能的作用机制提供了实验资料，具有重要的理论意义。