论文部分内容阅读
目的检测人乳腺癌中OPCML基因的表达、启动子甲基化状态及OPCML基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响，探讨OPCML基因表达下调、异常甲基化在乳腺癌形成过程中的可能作用机制。方法（1）应用组织芯片技术和免疫组织化学染色PV二步法检测OPCML蛋白在人乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性病变组织中的表达情况，分析其与临床病理特征及乳腺癌分子标记物之间的关系。Western-blot蛋白印记法检测OPCML蛋白在人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231，MD-MB-468，MCF-7，SK-BR-3, T47D,BT-549）中的表达情况。（2）通过MSP分析在人乳腺癌及相应癌旁组织中OPCML基因的甲基化改变，探讨OPCML基因作为乳腺癌临床病理检测分子标记物的可能性；（3)通过克隆形成实验、划痕愈合试验和Transwell侵袭实验分析OPCML基因的表达对人乳腺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力的影响，了解OPCML基因对人乳腺癌细胞的生物学作用。结果(1). PV二步免疫法示：在129例人乳腺癌组织中OPCML的阳性表达率为20.16%（26/129），41例乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率为90.24%（37/41），49例乳腺良性病变组织中的阳性表达率为75.51%（37/49），三组中表达水平有统计学差异（p<0.05）。在129例人乳腺癌组织中OPCML蛋白表达与组织学分级、淋巴结是否转移、pTNM分期有显著相关性(P＜0.05)； OPCML蛋白表达与Ki-67(r=-0.236)、Her-2（r=-0.262)、EGFR（r=-0.243)呈负相关关系(P＜0.05)；Western blot蛋白印记法示：OPCML在6种人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，MB468，MCF-7，SK-BR-3, T47D，BT-549中的蛋白表达均缺失，在癌旁组织中表达存在。(2).172例人乳腺癌组织样本中，140例出现异常甲基化改变，OPCML基因发生甲基化率81.40%（140/172），结合临床病理资料，仅Her-2表达与OPCML基因甲基化有统计学意义（P<0.05）；(3).OPCML基因成功转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后，MB-231细胞增殖能力下降，OPCML转染组和pcDNA3.1转染组MB-231细胞的克隆形成率分别为：(25.87±1.03)%，(47.33±1.27)%，P<0.05。OPCML组MB-231细胞的迁移距离(28.32±5.15)μm明显少于pcDNA3.1转染组（70.74±1.82）μm和未转染组（67.50+3.17）μm，P<0.05。OPCML组MB-231细胞的侵袭细胞数明显少于pcDNA3.1转染组和未转染组[(20.25±2.21)个vs(40.75±1.71)、(39.50±2.08)]，P<0.05。结论(1). OPCML基因在人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中低表达或表达缺失，其在人乳腺癌组织中的表达与组织学分级、淋巴结是否转移及病理分期显著相关，与Her-2、Ki-67和EGFR的表达呈负相关；(2). OPCML基因在人乳腺癌组织中存在启动子高甲基化，甲基化状态仅与Her-2表达显著相关，而与患者年龄、组织学分级、病理分期、激素受体状况等无显著相关性；(3). OPCML基因的表达对人乳腺癌细胞株MD-MB-231的增殖、迁移及侵袭有抑制作用，OPCML基因为一潜在的抑癌基因。