诱导成人成肌细胞转化为神经前体细胞及用于移植治疗局灶性脑缺血的实验研究

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目的 探讨成人成肌细胞在体外转化为神经前体细胞的可行性及成肌细胞来源的神经前体细胞移植治疗脑缺血的效果,为脑缺血的干细胞治疗寻找新途径。探讨脑缺血后经颈内动脉移植成肌细胞来源的神经前体细胞的可行性,为该细胞脑内移植的方式探索新方法。 方法 实验共分三部分。第一部分:从成人颞肌培养成肌细胞,通过体外诱导使其向神经前体细胞转化,通过RT-PCR和免疫细胞化学染色技术检测细胞诱导前后(巢蛋白,GFAP、NF68和Galc)的基因和蛋白表达情况,对成肌细胞向神经转分化进行鉴定。第二部分:用光化学法制作大鼠局灶性脑缺血模型,将成肌细胞来源的神经前体细胞移植到脑缺血大鼠的缺血灶附近大脑皮层。通过行为学评分试验(平衡木试验、感觉刺激试验和肢体放置试验)观察神经功能的变化;采用免疫组织化学染色的技术检测移植细胞抗原标志物(人核抗原、GFAP、MAP2和Galc)的表达,观察移植细胞的存活、迁移和分化情况;采用HE染色结合图像分析方法检测脑梗死体积的变化。第三部分:经短暂性脑缺血(大脑中动脉缺血)大鼠的颈内动脉注射成人成肌细胞及其来源的神经前体细胞,观察注射的细胞的存活、迁移和分化情况。 结果 第一部分:经体外诱导,成人成肌细胞变为悬浮生长的细胞球,免疫细胞化学染色见细胞球表达巢蛋白,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入试验阳性;细胞分化后表达NF68,GFAP和Galc。RT-PCR分析结果与免疫细胞化学染色结果一致。第二部分:成人成肌细胞及其来源的神经前体细胞移植后主要分布于大鼠脑梗死灶的附近,少量神经前体细胞见于脑梗死灶与细胞注射部位之间的胼胝体处。在脑梗死灶附近的神经前体细胞中,部分同时表达MAP-2抗原和人核抗原,部分同时表达GFAP抗原和人核抗原。而在移植的成肌细胞中,未见到此情况。平衡木试验、感觉刺激试验和肢体放置试验结果显示,细胞移植2周后各组大鼠的神经功能障碍均有改善,而接受成肌细胞来源神经前体细胞移植的大鼠神经功能改善优于其它两组,统计学分析显示差异具有显著性(P<0.05),其它两组间无差异(P>0.05)。各组大鼠脑梗死体积之间差异没有显著性(P>0.05)。
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