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目的:研究细胞毒素相关抗原(cagA)对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC)增殖、凋亡及其细胞外基质分泌的影响,探讨幽门螺杆菌感染与IgA肾病的关系,为IgA肾病的发病机制及防治研究提供新思路。方法:1、用不同浓度的 cagA 0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/m 1分别体外诱导培养RGMC细胞24h、48h、72h,采用CCK-8法检测肾小球系膜细胞增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液Ⅰ、Ⅲ型胶原的水平,探讨cagA对RGMC的增殖以及细胞外基质分泌的剂量、时间依赖性。2、依据cagA最适作用浓度与时间,将体外培养的RGMC随机分为空白对照组、IL-1(10ng/ml)阳性对照组和cag A(4μg/ml)组,给予相应的处理后培养72h,CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,RT-PCR和western blot法分别检测BAX、BCL-2和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA与蛋白的表达。结果:1.CCK-8结果显示,随着cagA浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖程度逐渐增加;ELISA检测结果显示,细胞培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌量随着cagA浓度和作用时间的延长均明显增高,具有时间-效应和剂量-效应关系;2.根据4 μg/ml作用72h作为cagA的最适浓度与刺激时间,结果显示,IL-1(10ng/ml)组和cagA(4μg/ml)组与空白对照组相比,细胞增殖明显增加,细胞外基质Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌增加(P<0.05);3.免疫组化结果显示,细胞培养72h,IL-1(10ng/ml)组和cagA(4μg/ml)组与空白对照组相比,增殖细胞核抗原表达均明显增加(P<0.05);4.PCR和Western blot结果显示,IL-1(10ng/ml)组和cagA(4μg/ml)组细胞培养72h后,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和BCL-2在基因和蛋白水平较空白对照组均明显增强(P<0.05),而BAX mRNA和蛋白较空白对照组表达减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、cagA呈时间和剂量依赖性诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质分泌;2、cagA通过诱导增殖细胞核抗原表达增加来促进大鼠肾小球系膜细胞增殖;3、cagA诱导肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质增多的机制与抑制凋亡同时促进Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达有关。