为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin6基因（Bmserpin-6）与家蚕表皮黑化硬化、蜕皮变态、先天性免疫等生理过程的关系，以家蚕（大造）为材料，采用实时荧光定量PCR方法，分析了家蚕多个发育时期，多个组织中Bmserpin-6基因转录变化。用脂多糖（lipopolysac charide, LPS）刺激5龄第3d家蚕，分析了刺激后不同时间点，脂肪体和血液中Bmserpin-6基因转录变化。同时将pET28a-serpin6原核表达载体转化到宿主菌，表达家蚕serpin6融合蛋白，重组融合蛋白经纯化回收，以此为抗原免疫昆明小鼠，成功制备了Bmserpin-6多克隆抗体。主要结果如下：（一）家蚕serpin6基因转录特异性分析（1）提取家蚕4龄幼虫（1～4d）头部、表皮、脂肪体、中肠和丝腺总RNA，反转录成cDNA。实时荧光定量PCR检测表明，Bmserpin-6基因在家蚕4龄幼虫（1～4d）的头部、表皮、脂肪体、中肠和丝腺都有转录，其中表皮中Bmserpin-6转录水平较高，与黑色素合成基因在家蚕表皮组织高表达具有一致性，由此推测Bmserpin-6可能参与了家蚕表皮黑色素沉积。提取3龄、4龄幼虫蜕皮过程中表皮总RNA，反转录成cDNA。实时荧光定量PCR检测表明，3龄、4龄幼虫蜕皮过程，Bmserpin-6在家蚕眠时转录水平降低，在将眠蚕和起蚕表皮中的转录量高于眠蚕，且起蚕转录水平明显上升。推测Bmserpin-6参与了家蚕蜕皮过程中表皮的黑化硬化。（2）提取5龄家蚕不同组织总RNA反转录成cDNA，实时荧光定量PCR检测5龄家蚕不同组织，马氏管、中肠、丝腺、脂肪体、头部、表皮、精巢和卵巢中mRNA转录水平，结果表明：在5龄第2d、第6d和第7d， Bmserpin-6在表皮中的转录量明显高于其它组织，在5龄第1d、第3d和第4d，在头部的转录量明显高于其它组织，Bmserpin-6在5龄家蚕（1～7d）各组织转录具有明显的时空特异性。5龄家蚕（1～7d）头部组织中Bmserpin-6转录比较，结果表明：在5龄初期至中期转录水平呈上升状态，5龄第4天达到最高值，5龄第5天转录水平突然降低，直至龄末一直低水平转录。与保幼激素的分泌趋势大致相同，家蚕头部为主要的内分泌器官，推测Bmserpin-6与家蚕变态发育过程中的激素分泌相关。（3）LPS刺激后Bmserpin-6基因的转录分析LPS刺激5龄第3d家蚕，实验组每头注射10微升脂多糖，对照组每头注射10微升无菌水。分别取注射后3、6、9、12和24h五个时间点的脂肪体与血淋巴，提取RNA，反转录成cDNA。实时荧光定量PCR检测表明，LPS刺激后，脂肪体和血淋巴中Bmserpin-6基因转录水平都明显上升。免疫刺激后在血液中9h时，Bmserpin-6基因转录水平达到最高值，9h后逐渐降低至正常水平；在家蚕脂肪体中6h时，Bmserpin-6基因转录水平最高，且在24h时又有一个高峰。（二） Bmserpin-6的原核表达及多克隆抗体的制备（1）将重组质粒pET28a-serpin6转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达重组蛋白，表达的重组蛋白使用镍柱纯化回收含6×his的融合蛋白。并采用SDS-PAGE检测重组蛋白表达，与对照组相比，能够检测到一条分子量约为45kDa的特异性条带。检测结果说明Bmserpin-6的融合蛋白在大肠杆菌中得到成功表达。（2）将在大肠杆菌内表达的Bmserpin-6融合蛋白，经镍柱纯化回收，以此为抗原，采用四次免疫方式，注射昆明小鼠进行抗原免疫，制备Bmserpin-6多克隆抗体血清。经Western blot和Elisa检测验证，特异性较高、效价达1:20000。本研究通过实时荧光定量PCR的方法对Bmserpin-6转录进行分析，结果表明该基因在家蚕表皮及头部组织具有转录特异性。推测Bmserpin-6参与家蚕表皮的黑化硬化，且在蜕皮变态发育过程中可能与激素的分泌相关。经免疫刺激后，Bmserpin-6的转录结果表明，该基因可能主要参与了脂肪体的免疫反应。本研究还成功制备Bmserpin-6多克隆抗体，为研究Bmserpin-6组织分布打下基础。