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目的: 通过微溶胶电纺技术将生物材料负载免疫分子,营造一个促进急性脊髓损伤(SCI)修复的局部微环境,该环境既能控制SCI继发炎症,同时又有桥连损伤神经的生物材料,协同促进SCI修复。 方法: 1.用微溶胶静电纺丝技术制备负载 CD80mAb 的左旋聚乳酸(PLLA)静电纺丝纤维支架后: (1)比较PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb三组支架的理化性能及生物相容性:使用透射电镜(TEM)检测纤维支架的内部结构,使用扫描电子显微镜(SEM)检测纤维支架的形貌特征,使用力学拉伸测试纤维支架的应变力。 (2)检测CD80mAb在PLLA支架的负载情况,以及释放效率。 (3)CCK-8法比较PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb纤维支架浸出液对细胞增殖的影响,检测纤维的生物相容性。 2. 建立SD大鼠胸椎第9节段(T9)右侧脊髓半横断损伤模型: 34只健康雄性6周龄SD大鼠G根据手术情况随机分为4组: 1,假手术组(n=7); 2,SCI组(n=10); 3, PLLA移植组(n=7); 4,PLLA-CD80mAb移植组(n=10)后: (1)在术后8周内统计大鼠死亡率,每周进行一次BBB评分评价神经功能恢复情况。 (2)术后8周行组织学检查及免疫组化:抗胶质纤维酸性蛋白( anti-GFAP )、抗神经丝蛋白 200 (anti-NF-200)、抗诱导型一氧化氮合酶(anti-iNOS)、抗白介素1β(anti-IL-1β)、抗白介素6(anti-IL-6)等检查。 结果: (1)PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb之间的形貌基本一致,直径变化不明显,透射电镜示负载抗体后有明显的核壳结构,力学拉伸实验证明负载抗体前后,不改变纤维支架的力学性能。 (2)通过荧光染色技术,验证PLLA成功的负载CD80mAb,释放曲线表明PLLA-CD80mAb可以有效的缓慢释放CD80mAb。 (3)CCK-8法显示PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb各组之间增殖无统计学差异,显示良好的生物相容性。 (4) 4只老鼠因不完全半横断而被淘汰(SCI组2,PLLA组1只,PLLA-CD80mAb组1只),最后留30只老鼠。左下肢术后PLLA-CD80mAb组第2和3周的评分明显高于SCI组,右下肢术后 PLLA-CD80mAb 组 BBB 评分略高于 PLLA-IgG 组,明显高于 SCI 组, PLLA-CD80mAb 组的生存率高于 PLLA-IgG 组,远高于 SCI 组。 (5)免疫组化显示:PLLA-CD80mAb 组的 GFAP 表达要明显少于 SCI组和 PLLA-IgG 组,而其 NF-200表达则明显高于SCI组。PLLA-IgG组的NF-200表达要高于SCI组。同时SCI组的IL-1β ,IL-6,iNOS的表达均明显高于PLLA-CD80mAb组,PLLA-IgG组的IL-1β , IL-6,iNOS的表达也高于PLLA-CD80mAb组。 结论: 通过微溶胶法实现静电纺丝纤维负载CD80mAb的方法,获得具有生物学活性的免疫调节功能支架,并可通过抑制炎症因子,调节脊髓损伤后的局部炎症环境,协同纤维支架的物理桥梁作用共同促进脊髓损伤的恢复。