负载CD80单克隆抗体微溶胶静电纺丝支架的构建及其促进大鼠半横断脊髓损伤修复的研究

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目的:  通过微溶胶电纺技术将生物材料负载免疫分子,营造一个促进急性脊髓损伤(SCI)修复的局部微环境,该环境既能控制SCI继发炎症,同时又有桥连损伤神经的生物材料,协同促进SCI修复。  方法:  1.用微溶胶静电纺丝技术制备负载 CD80mAb 的左旋聚乳酸(PLLA)静电纺丝纤维支架后:  (1)比较PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb三组支架的理化性能及生物相容性:使用透射电镜(TEM)检测纤维支架的内部结构,使用扫描电子显微镜(SEM)检测纤维支架的形貌特征,使用力学拉伸测试纤维支架的应变力。  (2)检测CD80mAb在PLLA支架的负载情况,以及释放效率。  (3)CCK-8法比较PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb纤维支架浸出液对细胞增殖的影响,检测纤维的生物相容性。  2. 建立SD大鼠胸椎第9节段(T9)右侧脊髓半横断损伤模型:  34只健康雄性6周龄SD大鼠G根据手术情况随机分为4组:  1,假手术组(n=7);  2,SCI组(n=10);  3, PLLA移植组(n=7);  4,PLLA-CD80mAb移植组(n=10)后:  (1)在术后8周内统计大鼠死亡率,每周进行一次BBB评分评价神经功能恢复情况。  (2)术后8周行组织学检查及免疫组化:抗胶质纤维酸性蛋白( anti-GFAP )、抗神经丝蛋白 200 (anti-NF-200)、抗诱导型一氧化氮合酶(anti-iNOS)、抗白介素1β(anti-IL-1β)、抗白介素6(anti-IL-6)等检查。  结果:  (1)PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb之间的形貌基本一致,直径变化不明显,透射电镜示负载抗体后有明显的核壳结构,力学拉伸实验证明负载抗体前后,不改变纤维支架的力学性能。  (2)通过荧光染色技术,验证PLLA成功的负载CD80mAb,释放曲线表明PLLA-CD80mAb可以有效的缓慢释放CD80mAb。  (3)CCK-8法显示PLLA, PLLA-IgG,PLLA-CD80mAb各组之间增殖无统计学差异,显示良好的生物相容性。  (4) 4只老鼠因不完全半横断而被淘汰(SCI组2,PLLA组1只,PLLA-CD80mAb组1只),最后留30只老鼠。左下肢术后PLLA-CD80mAb组第2和3周的评分明显高于SCI组,右下肢术后 PLLA-CD80mAb 组 BBB 评分略高于 PLLA-IgG 组,明显高于 SCI 组, PLLA-CD80mAb 组的生存率高于 PLLA-IgG 组,远高于 SCI 组。  (5)免疫组化显示:PLLA-CD80mAb 组的 GFAP 表达要明显少于 SCI组和 PLLA-IgG 组,而其 NF-200表达则明显高于SCI组。PLLA-IgG组的NF-200表达要高于SCI组。同时SCI组的IL-1β ,IL-6,iNOS的表达均明显高于PLLA-CD80mAb组,PLLA-IgG组的IL-1β , IL-6,iNOS的表达也高于PLLA-CD80mAb组。  结论:  通过微溶胶法实现静电纺丝纤维负载CD80mAb的方法,获得具有生物学活性的免疫调节功能支架,并可通过抑制炎症因子,调节脊髓损伤后的局部炎症环境,协同纤维支架的物理桥梁作用共同促进脊髓损伤的恢复。
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