应用细胞内PCR技术克隆白癜风自身抗体基因的研究

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白癜风的病因和发病机理尚未完全阐明,有证据表明,抗黑素细胞自身抗体的产生在白癜风的发生与发展过程中起重要作用。受研究方法的限制,迄今对白癜风相关自身抗体基因的认识十分有限。噬菌体抗体库技术是抗体研究领域的重要突破,通过扩增免疫球蛋白基因并使其在噬菌体表面展示而构建抗体库,可以方便地筛选到特异性抗体。然而获得的抗体基因是体外的随机组合,并不是体内原本的轻重链搭配,在自身抗体基因的研究上存在较大的局限性。细胞内PCR(In-Cell PCR)技术可获得亲本配对的抗原结合单位,从而得到编码抗体基因的准确信息,对于自身免疫性抗体的研究具有极广阔的前景。 在本课题中,我们培养了大量正常人的黑素细胞,经相差显微镜观察细胞形态,多巴染色鉴定,保证较高的黑素细胞纯度,将其作为抗原,以活细胞ELISA法和Westonblot法对50余名白癜风患者的血
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