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21世纪是海洋的世纪。海洋占全球表面积的71%,以其丰富的各种资源,为世纪各国广大人们所关注。海洋独特的环境,使海洋生物具有生物物种多样性、基因多样性、代谢机制的多样性和代谢产物的多样性,被誉为“天然药物的资源宝库”,海洋已成为世界各国开发新型药物的热点领域。 本课题采用的实验菌株F121112是从中国东海(东经120°45′22″~122°40′48″,北纬27°15′50″~31°24′7″)底泥中分离到的一株弱嗜盐菌,最适盐度为2.5%,经稻瘟霉模型筛选表明对稻瘟霉有强烈抑制作用,复筛时活性不丢失。该菌为革兰阳性细菌、芽孢中生,生理生化实验表明具有枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的特征。对F121112的16S rDNA进行序列测定,证实是枯草芽胞杆菌的一种。 在对F121112菌株的发酵条件进行优化后,F121112菌株的最佳摇瓶发酵条件是:发酵培养基配方为蛋白胨0.4%、酵母提取物0.5%,牛肉膏0.4%,葡萄糖0.5%;培养基初始pH值为6.0~6.5,接种量4%~6%、摇瓶装量60 mL/250 mL三角瓶、振荡频率130 r/min、发酵温度25℃、培养时间120 h。在此条件下培养,发酵液活性最强。 对F121112菌株产生的次生代谢产物的热稳定性研究结果表明,发酵液对热比较稳定,80℃处理1 h,其活性没有明显的下降。 采用生物活性跟踪分离的方法,通过硅胶柱层析、ODS C-18柱层析、Sephadex LH-20凝胶层析以及RP-HPLC等各种色谱技术,对F121112产生的生物活性物质进行分离纯化,得到了20个化合物。利用1H-NMR、13C-NMR、EI-MS、等波谱技术解析出其中9个化合物和一个混合物的结构。分别是:环(苯丙氨酸-丙氨酸)Ⅰ、环(苯丙氨酸-缬氨酸)Ⅱ、环(D-苯丙氨酸-L-亮氨酸)Ⅲ、环(D-苯丙氨酸-D-脯氨酸)Ⅳ、环(L-缬氨酸-L-亮氨酸)Ⅴ、3-甲基-6-(2-甲基丁基)哌嗪-2,5-二酮Ⅵ、环(L-色氨酸-L-缬氨酸)Ⅶ、尿嘧啶Ⅷ、L-色氨酸Ⅸ和环(丙氨酸-脯氨酸)Ⅹ。其中化合物Ⅵ是首次从天然产物中分离得到的。化合物