目的：构建鹅源粪肠球菌efaA基因的原核表达载体,在大肠球菌工程菌BL21中表达,对所表达的efaA蛋白进行免疫原性检测及生物信息学分析。方法：提取粪肠球菌标准株与分离株的总DNA,做扩增模板；登陆GenBank,根据其公布的粪肠球菌心内膜炎抗原的碱基序列,应用Primer Premier5.0与Oligo6.0软件设计一对efaA的特异性引物；摸索PCR扩增条件扩增成功后,进行凝胶电泳分离并回收目的片段；将该片段与pMD18-T克隆载体连接,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞；筛选阳性克隆菌,提取质粒,进行PCR和单双酶切鉴定,确证克隆成功后送公司测序。酶切克隆成功的pMD18-T-efaA重组质粒,构建pET-28a-efaA重组质粒并将其转至大肠杆菌BL21感受态细胞中：筛选pET-28a-efaA/BL21阳性菌株,分别在不同浓度、时间及温度条件下诱导表达,确定最佳诱导条件；通过蛋白电泳SDS-PAGE鉴定确证后,用镍柱纯化,得到纯化的efaA蛋白。用SDS-PAGE和Western blot两种方法鉴定efaA蛋白。对表达的efaA氨基酸序列进行生物信息学分析：根据对efaA氨基酸组分、分子质量、滴定曲线与等电点等分析,预测其一级结构中糖基化位点等,根据对其可塑性、亲水性、抗原性指数和表面可及性以及p-转角、无规则卷曲等的综合分析,预测潜在抗原表位。结果：成功克隆了鹅源粪肠球菌菌株心内膜炎抗原efaA基因,其碱基序列为726bp,编码242个氨基酸。成功构建了pET-28a-efaA/BL21表达载体,确定最佳诱导条件为,IPTG终浓度1.0mmol/L、温度28℃、时间4h,所表达的蛋白为30KD,大小与预期一致。SDS-PAGE和Western blot鉴定,efaA蛋白为30KD,与预期一致。鹅源粪肠球菌efaA蛋白的第13～19、26～33、66～73、92-105、141～149、152-164、190-200、210～260位氨基酸,其亲水性指数＞0、AI≥0、表面可及性＞1,具有β-折叠和无规则卷曲,是efaA蛋白的B细胞潜在抗原表位。结论：成功克隆了鹅源粪肠球菌efaA基因,表达了efaA蛋白,确定了表达最佳条件,综合预测了efaA蛋白的B细胞潜在抗原表位。