精子介导转基因(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)技术是生产转基因动物的有效途径,具有简单、高效等特点。精子具有自动结合、转运、整合外源DNA的能力,并在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物。但是SMGT在哺乳动物上存在着极大的随机性和不确定性,转运机制尚不清楚,限制了该方法的广泛应用。精子介导转基因过程中需要多种分子的相互作用,研究报道CD4分子是参与精子介导的重要分子之一。早期研究已利用酵母双杂交技术,筛选出与CD4相互作用的候选分子CD320和RanBP9,免疫共沉淀验证了CD320和RanBP9与CD4分子之间在真核细胞中存在相互作用;且克隆了山羊CD320和RanBP9基因序列,并分析其在山羊各个组织中的相对表达量。但是,CD320和RanBP9的遗传多态性及在精子转染外源DNA中的功能尚不清楚。因此,本研究在已有实验基础上,研究了CD320和RanBP9分子的遗传多态性,在山羊睾丸、附睾组织中的表达以及在精子转染外源DNA中的作用,为研究精子介导转基因机制奠定基础,提供数据支持。主要研究方法及结果如下:1、利用PCR-SSCP技术研究了CD320基因外显子3和3’非编码区在3个山羊品种(大足黑山羊,n=40;合川白山羊,n=44;济宁青山羊,n=33)中的多态性。在选取的3个山羊品种中,CD320基因外显子3没有检测到SNPs位点,3’非编码区检测到了SNPs位点,但是,多态性位点都是位于非编码区,没有引起氨基酸的改变。3个山羊品种均只检测到AA型和AB型2种基因型。3个山羊品种的PIC、He、Ne从小到大的排列顺序是合川白山羊、大足黑山羊和济宁青山羊。2、荧光定量PCR研究CD320在山羊睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾中的相对表达量。结果表明,CD320基因相对表达量在附睾尾中最高,与其他组织相比差异极显著(P<0.01)。免疫荧光结果表明:CD320蛋白在附睾体和附睾尾中表达量较高,主要集中在附睾小管上皮柱状细胞中表达;另外,CD320蛋白主要在精子的顶体帽处有表达,精子的其他部位不表达。3、精子转染外源DNA实验中,实验组精子与CD320抗体共孵育,阳性精子转染率为9.79%,对照组阳性精子转染率为16.08%,说明CD320抗体封闭CD320之后,精子转染外源DNA的效率显著降低。4、利用PCR-SSCP技术研究了RanBP9基因外显子11和3’非编码区在3个山羊品种(大足黑山羊,n=40,合川白山羊,n=44,济宁青山羊,n=33)中的多态性。结果表明:Ran BP9基因在这3个山羊品种中没有检测到SNPs位点。5、荧光定量PCR研究RanBP9基因在山羊睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾中的相对表达量。结果表明,RanBP9基因在附睾体中的相对表达量最高,与其他组织相比差异极显著(P<0.01)。免疫荧光结果显示,RanBP9蛋白在附睾体和附睾尾的上皮柱状细胞中表达量较高,而且,RanBP9蛋白在精子头部除赤道节部位外都有表达,在精子尾部主段也有表达。6、精子转染外源DNA的实验组中,精子与RanBP9抗体共孵育,阳性精子转染率为9.40%,对照组阳性精子转染率为16.08%,抗体封闭RanBP9之后,精子转染外源DNA的效率明显降低。