芹菜素与曲昔匹特的分子印迹研究及色谱定量分析

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分子印迹技术又称为分子烙印技术,它是指制备对某一特定的目标分子(印迹分子)具有预定选择性和特殊亲合性的技术。它在印迹分子存在的情况下,功能性单体与交联剂共聚制得高交联的聚合物网络,移去印迹分子后获得在三维空间构象和结合位点上与某一特定分子(模板分子,印迹分子)完全互补的聚合物。近年来,该技术已广泛应用于色谱分离、抗体或受体模拟、生物传感器以及生物酶模拟和催化合成等诸多领域,并因此成为化学和生物学交叉的新兴领域之一,得到世界注目并迅速发展。研究的主要内容有:(1)介绍了分子印迹技术及高效液相色谱法的原理、方法、应用及展望;(2)采用本体聚合法合成芹菜素分子印迹聚合物。紫外光度法证明了模板分子与功能单体之间存在相互作用,并据此选择了聚合反应时合适的溶剂并推测出聚合物的印迹机理。傅立叶红外光谱仪测定了聚合物的结构特征。平衡结合实验研究了聚合物的吸附特性,结果表明,在所研究的浓度范围内(0.1 mmol·L-1~2.5 mmol·L-1),MIP的吸附量大于BP的吸附量,由Scatchard分析得聚合物对芹菜素的识别主要有两类结合位点,其离解常数KD和最大表观结合量Qmax分别为:2.52×10-4和0.54×10-3 mol·L-1;2.65和18.89μmol·g-1。分子印迹聚合物呈现出空白聚合物没有的高选择性。(3)建立了新型胃药曲昔匹特胶囊的反相高效液相色谱分析方法。比较了内标法和外标法,内标法以茶碱对照品作为内标物,曲昔匹特在10~160μg·mL-1的范围内质量浓度与峰面积比呈现良好的线性关系,回收率在98.61%~99.91%之间,精密度相对标准偏差为1.35%。外标法中曲昔匹特在40~110μg·mL-1的范围内质量浓度与峰面积比呈现良好的线性关系,回收率在98.84%~100.00%之间,精密度相对标准偏差为1.33%。该方法准确可靠、灵敏度高、重现性好。(4)建立了凌宵花中芹菜素含量的测定方法。采用C18柱(5μm,150mm×4.6 mm),流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(50:50),室温操作,检测波长336nm。在1.60~12.80 mg·L-1范围内,芹菜素进样量与峰面积响应值呈良好的线性关系,r=0.9998;回收率为98.19%~101.64%,RSD为1.46% (n=5)。方法简便,灵敏度高,重复性好,可用于凌宵花中黄酮类成分的含量测定。
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