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【目的】:肺癌是目前世界上死亡率最高的疾病之一,研究新型的药物对肺癌的治疗起关键作用。雷公藤氯内酯醇是从雷公藤中提取出来的一种药物,具有更低的毒性,已有研究发现,雷公藤氯内酯醇可诱导肺癌细胞的自噬,但其发生机制尚未阐明。在本研究中,我们探讨了雷公藤氯内酯醇通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肺癌细胞的自噬,并且首次发现了雷公藤氯内酯醇可增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。本研究旨在明确T4在肺癌治疗中所可能扮演的角色以及发挥作用的下游机制。【方法】:1.A549肺腺癌细胞用高糖DMEM+10%胎牛血清培养于培养瓶中,A549/DDP顺铂耐药的肺腺癌细胞用1640+10%胎牛血清培养于培养瓶中。先用CCK8实验来测定雷公藤氯内酯醇的最佳作用浓度,然后用最佳作用浓度的雷公藤氯内酯醇去干预细胞,提取总蛋白观察LC3(自噬特异性蛋白)的变化,PI3K/Akt/mTOR信号通路的蛋白变化及其磷酸化水平的变化。2.将细胞消化接种于6孔板后,先用wortmannin(PI3K抑制剂),perifosine(Akt抑制剂)或rapamycin(m TOR抑制剂)预处理1h后,再加入最佳作用浓度的雷公藤氯内酯醇去干预细胞,提取总蛋白观察LC3(自噬特异性蛋白)的变化,PI3K/Akt/mTOR信号通路的蛋白变化及其磷酸化水平的变化。3.将细胞消化接种于96孔板后,加入最佳作用浓度的雷公藤氯内酯醇后,通过CCK8来检测PI3K及AKT的活性。4.将细胞消化接种于6孔板后,用过表达的AKT质粒去干预细胞,24小时后提取细胞总蛋白,观察LC3的表达变化。5.将细胞消化接种于6孔或96孔后,用CCK8,qPCR和WB等方法检测雷公藤氯内酯醇作用后的A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。【结果】:1.用CCK8实验来测定雷公藤氯内酯醇(T4)对A549和A549/DDP的最佳作用浓度为200nM,24h。WB显示PI3-K,PI3-P,Akt,TSC2,m TOR,p70S6K和4E-BP1的蛋白表达水平没有明显变化,但其对应的磷酸化水平有下降。2.当抑制剂和雷公藤氯内酯醇(T4)共同作用的时候,WB结果显示LC3明显表达增强,而在对照组和实验组中,PI3-K,PI3-P,Akt,TSC2,mTOR,p70S6K and4E-BP1的表达都没有变化,但他们的磷酸化水平均有一定的变化。3.雷公藤氯内酯醇(T4)可以降低A549和A549/DDP细胞中PI3K及AKT的活性。4.雷公藤氯内酯醇(T4)作用肺腺癌细胞后,LC3的表达水平增强,而过表达的AKT质粒可使T4的作用减弱。5.雷公藤氯内酯醇(T4)作用A549/DDP细胞后,CCK8显示顺铂对细胞的致死作用明显增强,qPCR和WB都显示MDR1的表达水平明显下降。【结论】:1.雷公藤氯内酯醇可以通过自噬的方式诱导肺癌细胞的死亡。2.雷公藤氯内酯醇通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肺癌细胞的自噬。3.雷公藤氯内酯醇能有效的增加A549/DDP对顺铂的敏感性。