目的：本研究制备携带人凝血因子VIII(hFVIII)基因的重组慢病毒，并肌肉注射到正常大鼠股四头肌，观察体内的表达。 方法：将含hFVIII基因的慢病毒载体与包装质粒cMV△R8.74、包膜质粒VSV-G转染产毒细胞293T细胞，以制备包含EPO cDNA的重组慢病毒。将制备好的重组慢病毒感染HeLa细胞，检测培养上清中hFVIII的表达量；直接肌肉注射正常大鼠后，检测血浆中hFVIII抗原浓度和抗体。取注射部位组织中提取DNA进行PCR。 结果：48h后取上清测定hFVIII抗原高表达(0.7±0.1)ng/ml。将制备好的重组慢病毒(1×10<8>IU/ml)直接肌肉注射到正常大鼠后血清中可检测到高水平的hFVIII抗原，最高达(33.1±0.1)ng/ml，持续时间长达20周。血清hFVIII抗体第1周最高达(133.1±5.6)BU/ml，持续到实验期间。除在注射部位组织外，其它主要脏器均未观察到hFVIII基因的存在。 结论：制备的重组慢病毒在培养细胞中高水平表达，肌肉注射后在正常大鼠体内能构建并长时间稳定表达，为血友病A基因治疗提供理论和实验依据。