癌症已经成为导致死亡的主要原因,在化学疗法中,许多的治疗药物出现了严重的耐药性；部分药物引起了一系列的副作用。从天然产物中筛选没有副作用的高效的抗癌药物十分有必要。利用药用菌菇来治疗癌症已经由来已久。菌菇生长过程中产生许多代谢物,当中有一些代谢物已被证明能干涉癌症发展中的一些环节,从而直接的用于癌症的治疗。许多的多孔菌长期以来一直作为草药应用于各种疾病,例如,灵芝(Ganoderma lucidum)、硫磺菌(Laetiporus sulphureus)、云芝(Trametes versicolor)、猪苓(Grifola umbellata)、桦褐孔菌(Inonotus obliquus)和茯苓(Wolfiporia cocos)等。桦菌芝是多孔菌科真菌,具有悠久的药用历史价值。但是,到目前为止,可查的关于桦菌芝抗肿瘤效应的研究资料非常稀少,对于该药物的作用机制的探讨更是寥寥无几。为全面的了解该菌物的抗肿瘤价值,为癌症药物的开发提供实验理论依据,本实验做了大量基础性的研究工作。1、离体条件下,检测桦菌芝乙醇提取物对白血病细胞K562的增殖抑制能力；在体条件下,评估该提取物的肝脏毒性。通过MTT法检测40-120μg/ml药物浓度条件下,桦菌芝乙醇总提物物对K562白血病细胞的增殖抑制效应；利用DNA片段化检测实验、DAPI染色后显微镜观察实验和彗星电泳实验来检测细胞内DNA损伤。口服灌胃桦菌芝乙醇总提取物后,取血,分离血清,检测GPT和GOT酶活力变化。实验结果显示,桦菌芝乙醇提取物以时间和浓度依赖的方式抑制K562细胞的增殖,抑制细胞增殖的机制可能与造成细胞DNA损伤相关。同时,两种酶检测显示该提取物对肝脏没有毒性。2、从诱导细胞凋亡角度来研究桦菌芝乙醇提取物的乙酸乙酯组分(PFEAF)抑制K562增殖的机制,并分析其主要化合物组成。结果表明,桦菌芝乙醇提取物乙酸乙酯组分提取物能够抑制肿瘤细胞K562的增殖,同时抑制增殖效应与细胞周期阻滞和细胞凋亡诱导有关。细胞的形态学检测和生化检测显示在药物处理细胞内发生了凋亡事件,ROS的产生、线粒体膜电位的降低和caspase-3口PARP剪切片段的出现进一步证明了细胞内凋亡的发生。更重要的是,桦菌芝PFEAF提取物对K562细胞的细胞毒作用是选择性的,对正常细胞没有抑制增殖能力。气相色谱-质谱分析显示提取物中主要的组成物质是邻苯二甲酸二丁酯。3、对桦菌芝乙醇提取物氯仿组分抑制肿瘤细胞生长及其机制进行研究,同时分析该提取物的主要化学成分组成。利用气相色谱-质谱技术来分析提取物中所含有的主要代谢物；利用MTT方法来检测细胞的存活；利用电子扫描显微镜观察细胞膜损伤；PI、DiBAC4(3)染色后流式细胞仪检测细胞膜损伤；Annexin V-PE/7-AAD染色后,检测细胞凋亡；细胞内Ca2+、ROS、△ψm的变化通过流式细胞仪进行检测。结果表明,桦菌芝乙醇提取物氯仿组分能抑制K562细胞的增殖,药物孵育造成细胞膜损伤,影响细胞内Ca2+浓度变化,促使细胞内ROS大量生成、线粒体膜电位水平下降,从而诱导了K562细胞的凋亡。4、探究了桦菌芝乙醇提取物石油醚组分的化学成分组成及其抗肿瘤效应。利用气相色谱-质谱技术分析发现,在石油醚组分里存在9种主要的化合物。抗肿瘤能力分析方面,离体条件下,桦菌芝乙醇提取物石油醚组分对S180细胞有细胞毒活性,并且依赖于药物浓度和孵育时间,对细胞的杀伤可能与诱导细胞凋亡有关。在该提取物作用于细胞后,细胞内线粒体膜电位降低、细胞内大量生成活性氧,表明该药物诱导的细胞凋亡途径是线粒体依赖、活性氧介导的。与离体实验结果相一致的是,在体条件下,桦菌芝乙醇提取物石油醚组分同样能抑制荷瘤小鼠上S180肉瘤的生长,同时,对免疫器官没有大的毒性伤害。