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背景胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。在我国,随着人口老龄化进程加快,以及生活压力和饮食习惯的改变,发病率居高不下并且逐步年轻化。部分胃癌患者在治疗过程中出现肿瘤细胞浸润及转移,最终导致死亡。深入研究胃癌的发生发展有重要的意义。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一种膜磷脂类分解和代谢产物,S1P是由鞘氨醇经由鞘氨醇激酶(Sphingosinekinase,SPHK)磷酸化产生,可通过自分泌或旁分泌的方式作用于细胞内或细胞外,产生一系列的免疫效应,同时也参与肿瘤相关活动包括细胞的增殖、迁移。除ABC家族外,鞘氨醇-1-磷酸转运体(spinsterhomologue 2,Spns2)也作为S1P的转运体参与S1P的转运。Spns2是一个有12个跨膜区域的蛋白质(含有504个氨基酸残基),2009年首先被发现于斑马鱼中,Spns2的缺失影响斑马鱼心肌元细胞迁移,导致其出现两个心脏。以往认为Spns2主要与免疫系统有关,如Shigetomo Fukuhara等[21]发现敲除Spns2可造成循环中S1P的浓度显著下降,从而导致成熟的T、B淋巴细胞聚集在胸腺,而血液和外周淋巴器官中淋巴细胞显著减少。与肿瘤相关研究少见报道,2016年Eric Bradley等[23]发现Spns2与非小细胞肺癌有关,敲除Spns2可以加快癌细胞迁移,首次揭示Spns2在非小细胞型肺癌细胞中具有调节作用。Spns2在胃癌中的相关研究未见报道,本实验旨在研究Spns在胃癌组织的表达及其过表达和下调对胃癌SGC-7901细胞生物学功能的影响。方法1.收集江苏省肿瘤医院胃外科术后胃癌/癌旁组织20对(男12,女8),通过免疫组化法检测比较Spns2蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达差异;2.构建过表达Spns2的pEX-l(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核载体和小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(以空载体质粒和无关序列siRNA分别作为阴性对照),转染人胃癌SGC-7901细胞,实验组分别命名为pEX-1-Spns2组/siRNA-Spns2组,对照组命名pEX-1组/siRNA-NC组,荧光显微镜观察转染效率。3.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot分别检测转染后各组Spns2 mRNA和蛋白的表达水平,确认在胃癌细胞Spns2过表达和下调的效果;4.采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell小室实验、划痕实验检测Spns2转染过表达质粒和siRNA对SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力的影响。结果:1.免疫组化显示20例胃癌和癌旁组织Spns2的表达强度分别(0.39±0.04)和(0.45±0.02),在胃癌组织表达低于正常组织(p<0.05)。2.成功构建过表达Spns2的pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)真核载体和siRNA,转染效率分别约为60%和75%。3.RT-PCR和Western blot结果显示转染过表达质粒后SGC-7901细胞的Spns2 mRNA和蛋白的表达水平均升高,转染siRNA后Spns2 mRNA和蛋白的表达均降低。4.和各自的阴性对照组相比,CCK-8结果显示,pEX-1-Spns2抑制SGC-7901细胞的增殖(p<0.05),siRNA-Spns2促进增殖(p<0.05);克隆形成实验结果显示,pEX-1-Spns2能够降低SGC-7901细胞的克隆形成率,而siRNA-Spns2能够提高克隆形成率;Transwell实验比较穿膜细胞数后显示,pEX-1-Spns2能够抑制SGC-7901细胞的迁移,而siRNA-Spns2能够促进迁移;划痕实验显示pEX-1-Spns2组细胞迁移率降低,siRNA-Spns2组细胞迁移率增加。结论:Spns2在胃癌组织中的表达低于癌旁正常组织的表达。上调Spns2的表达可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移;下调Spns2的表达则作用相反。以上结果均提示Spns2在胃癌的发生中可能起到抑制作用,Spns2可成为胃癌早起检测或分子靶向治疗的新靶点。