舌癌作为口腔颌面部中最为常见的恶性肿瘤，其临床表现多为溃疡型或浸润型，疼痛明显，浸润性强，生长快速，伴有舌运动受限，进食困难，易有颈淋巴结转移等特点，严重影响着患者的健康和生活质量。Notch信号通路自发现以来已经被证实与多种肿瘤有着紧密的联系，在课题组前期研究中，发现 Notch受体中Notch1、Notch2和下游相关基因Hes1、Hey1均在涎腺腺样囊性癌中发挥着促癌作用，导致其迁移、侵袭和增殖能力的下降，应用免疫组化法证实在舌癌组织中Notch1、Notch2表达量均高于癌旁组织。在课题组前期实验的基础上，本课题选取Notch2基因，通过抑制或过表达Notch2基因后研究舌癌细胞（CAL-27）增殖、凋亡、迁移、侵袭及蛋白表达情况，并探讨可能的机制及临床意义，将siRNA干扰后的细胞接种于裸鼠，进行体内实验研究。本课题可从以下两个部分进行研究，分述如下：　　第一部分：Notch2抑制或过表达瞬时转染效果的验证。　　目的：验证siRNA干扰技术和Notch2过表达载体的瞬时转染是否有效。　　方法：设计合成Notch2的siRNA，转染舌癌细胞株CAL-27后，通过Real-time PCR技术筛选出两条有效的siRNA，使Notch2表达下调，用Western blot技术检测蛋白的表达情况。运用基因克隆技术将 Notch2的 NICD段序列克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro空载体中，构建重组质粒pCDH-Notch2，用酶切及DNA测序进行鉴定，将构建成功的pCDH-Notch2质粒转染CAL-27细胞并用Real-time PCR技术和Western blot技术检测Notch2表达水平的变化。　　结果：Real-time PCR技术筛选的两条siRNA有效的抑制了CAL-27细胞中Notch2的表达，并在蛋白水平显示Notch2表达下调。重组质粒pCDH-Notch2双酶切鉴定及DNA测序结果正确，转染CAL-27细胞后通过Real-time PCR技术和Western blot技术验证，在mRNA水平及蛋白水平均显示细胞Notch2的表达上调。　　结论：siRNA干扰技术与 Notch2过表达载体的瞬时转染能有效的抑制或过表达Notch2基因。　　第二部分：Notch2对舌癌细胞株CAL-27功能的影响。　　目的：研究抑制或过表达Notch2对CAL-27功能的影响。　　方法：用已筛选的siRNA和重组质粒pCDH-Notch2分别转染CAL-27细胞后，采用划痕愈合实验、无包被 Matrigel的侵袭小室法研究细胞体外迁移能力的变化；侵袭小室法研究细胞体外侵袭能力的变化；CCK8法和平板克隆形成实验研究细胞体外增殖能力的变化；Annexin V/PI双染色法研究细胞凋亡情况；Real-time PCR技术检测 Notch信号通路相关下游基因的改变情况，建立裸鼠皮下成瘤模型观察抑制Notch2后瘤体的生长情况。　　结果：运用siRNA转染CAL-27细胞使Notch2的表达下调后，划痕愈合实验、侵袭小室结果显示细胞迁移、侵袭能力减弱；CCK8法、平板克隆形成实验结果表明细胞增殖能力下降；Annexin V/PI双染色法结果发现抑制Notch2后细胞早、晚期凋亡率相较于对照组均升高；Real-time PCR结果显示Notch信号通路相关下游基因（Hey1、Hey2、Hes1、Ccnd1、Id4）的表达下调。重组质粒pCDH-Notch2转染CAL-27细胞使 Notch2的表达上调后，划痕愈合实验、侵袭小室结果显示细胞迁移、侵袭能力增强；CCK8法、平板克隆形成实验结果显示细胞增殖能力增强；Real-time PCR结果显示Notch信号通路相关下游基因（Hey1、Hey2、Hes1、Ccnd1、Id4）表达上调。裸鼠皮下成瘤实验发现siRNA干扰组和对照组裸鼠均百分百成瘤， siRNA干扰组的瘤体体积和重量均小于对照组。　　结论：抑制舌癌细胞株CAL-27中Notch2的表达后，细胞的迁移、侵袭和增殖能力均减弱，细胞的凋亡率升高，Notch信号通路相关下游基因（Hey1、Hey2、Hes1、Ccnd1、Id4）表达下调；反之，过表达CAL-27细胞中Notch2后，细胞的迁移、侵袭和增殖能力均增强，Notch信号通路相关下游基因（Hey1、Hey2、Hes1、Ccnd1、Id4）表达上调。