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目的:研究参葛方通过抑制单纯高脂饮食诱导的NASH模型小鼠肝脏氧化应激、炎症反应及调节脂质代谢治疗NASH的相关机制。方法:1.分组:将76只雄性C57BL/6J小鼠,适应性喂养一周后,按体重进行区组划分为正常组、模型组、参葛方低剂量组、参葛方中剂量组、参葛方高剂量组、易善复组、非诺贝特组,其中正常组与模型组每组13只、其余各用药组10只。2.造模及鉴定:正常组予普通饮食,其余组均予高脂饮食,12周时,正常组与模型组各取3只小鼠,通过大体观察、血脂、肝脏脂质含量及血清转氨酶的检测及组织学染色,进行模型鉴定,后续饮食同前。3.给药方法:12周后,正常组予蒸馏水灌胃,参葛方低剂量组、中剂量组和高剂量组的小鼠,分别按照7.875g/kg/d、15.75g/kg/d(即人的等效剂量)、31.5g/kg/d用药量给予参葛方灌胃,易善复和非诺贝特按人的等效剂量灌胃(分别为0.2052g/kg/d、0.03g/kg/d),按0.1ml/10g调整小鼠灌胃量,每天一次,药物治疗4周后处死取材。4.各项指标检测方法:(1)参葛方对NASH模型小鼠体重、肝脏指数、肝脏脂质沉积及代谢的调节作用:称量各组小鼠体重、肝重、脾重,并计算脏器指数,肝组织油红O染色法观察脂质沉积情况,生化法检测血清中TG、TC、LDL-c、HDL-c、Glu、UA、Cr的水平及肝组织匀浆上清的TG和TC含量,Real-Time PCR法检测脂肪酸氧化基因CPT1、PPAR-α的表达水平;(2)参葛方对NASH模型小鼠的抗炎保肝作用:生化法检测血清ALT、AST含量,ELISA法检测血清TNF-α的水平,Real-Time PCR法检测肝组织TNF-α、CD68及F4/80m RNA的表达水平,肝组织HE染色法观察炎症浸润情况;(3)参葛方对NASH模型小鼠肝脏氧化应激反应的抑制作用:生化法检测肝组织匀浆上清中MDA的含量,ELISA法检测血清中脂联素的水平,Real-Time PCR法检测Adipo R1、Adipo R2、SIRT1、PGC1α及NRF2m RNA的表达水平,Western Blot法检测小鼠肝组织Adiopo R1、p-AMPK/AMPK、SIRT1、SIRT3、PGC1α等脂联素信通路中相关蛋白的表达水平。结果:1.NASH小鼠模型鉴定与正常组相比,模型组体重和肝重显著增加(P<0.01);血清ALT、AST及肝组织TG水平显著上升(P<0.05);小鼠肝组织HE染色显示肝小叶结构紊乱、呈现混合型脂肪变(小泡型为主兼有大泡型)、小叶内少量炎症细胞浸润、肝细胞肿胀疏松,NAS评分为4.67±1.53分;油红染色则显示大量橘红色成片的脂滴2.参葛方治疗NASH小鼠模型的疗效及机制(1)参葛方能减轻NASH模型小鼠体重及肝重,减少肝脏脂质沉积及调节代谢:与正常组相比,模型组小鼠肝脏体积增大、边缘较钝、颜色偏淡黄、质地如泥沙样且油腻、内脏可见大量脂肪沉积;体重、肝脏指数显著增加(P<0.05);油红染色则见大量成片的脂滴;血清TG、TC、LDL-c、FBG、Cr、肝组织TG、TC均有不同程度的增加(P<0.05);肝组织PPAR-α和CPT1 m RNA的表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各用药组肝脏组织色泽偏红、油腻感不明显;各用药组均能显著降低NASH模型小鼠的体重(P<0.0001);除参葛方低剂量组和非诺贝特组外,其余各组肝脏指数均明显下降(P<0.01);肝组织油红O染色显示各用药组脂滴数量减少;除易善复组外,各组均能显著降低血清TG及肝脏TG水平(P<0.05);除参葛方低、中剂量组外,其余各组均能显著降低血清TC水平(P<0.001);除参葛方低剂量组外,其余各组均能显著降低血清LDL-c水平(P<0.05);除参葛方低剂量组外,其余各组均能显著上调脂肪酸氧化基因PPAR-α和CPT1 m RNA的表达水平(P<0.01)。(2)参葛方能减轻NASH模型小鼠的炎症损伤:与正常组相比,模型组小鼠肝脏HE染色显示满视野的肝细胞脂肪变、小叶内炎症细胞浸润,肝细胞肿胀疏松;NAS评分为5.3±1.15分;血清ALT、AST、TNF-α水平及肝组织TNF-α、CD68、F4/80 m RNA的表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,各用药组均能降低肝细胞脂肪变的程度及小叶内炎症细胞浸润的情况,降低NAS评分;除参葛方低剂量组外,其余各用药组均能显著降低ALT水平(P<0.0001);除易善复组外,各组均能显著减低血清AST水平(P<0.05)各用药组均能显著降低血清TNF-α水平及肝组织中巨噬细胞表面标志物CD68、F4/80m RNA的表达水平(P<0.01);除参葛方低剂量组外,各用药组小鼠肝组织TNF-αm RNA的水平显著下降(P<0.05)。(3)参葛方能减轻NASH模型小鼠肝脏氧化应激反应:与正常组相比,模型组小鼠肝脏氧化应激产物MDA显著增加(P<0.0001)小鼠血清脂联素及肝脏脂联素受体水平显著下降(P<0.01)而调节氧化应激反应相关的基因如p-AMPK、SIRT1、SIRT3、PGC1α、NRF2等表达水平均显著下调(P<0.01);与模型组相比,各用药组均能显著降低肝组织MDA水平(P<0.0001);除参葛方低剂量组外,各用药组均能显著上调血清脂联素及Adipo R1、Adiopo R2、SIRT1、PGC1α、SIRT3、NRF2表达水平(P<0.01)。结论:1.参葛方对NASH模型小鼠的减重降脂作用与增加脂肪酸氧化基因PPAR-α及CPT1的表达水平有关;2.参葛方对NASH模型小鼠的抗炎保肝作用与减少肝组织中KC细胞数量、降低TNF-α的表达水平有关;3.参葛方抑制NASH模型小鼠肝脏氧化应激反应与激活APN信号通路有关。