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1．自屠宰场采集猪卵巢，用抽吸法采集卵母细胞，选择外周卵丘细胞包裹致密、卵母细胞胞质均一的卵母细胞(A，B级)进行体外成熟培养，研究其相关影响因素。结果表明：①A(M199+10％FBS+10IU／ml PMSG+10IU／ml hCG+2.5IU／ml FSH)、B(M199+10％FBS+10IU／ml PMSG+10IU／ml hCG+10％PFF)、C(M199+10％FBS+10IU／ml hCG)和D(M199+10IU／ml PMSG+25mg／ml BSA)4组成熟培养液进行猪卵母细胞体外成熟，成熟率分别为61.8％、64.0％、38.3％和66.1％，A，B，D 3组之间无显著性差异(P＞0.05)，A，B，D组与C组间差异极为显著(P＜0.01)。其中D组成熟卵母细胞卵周隙和第一极体均较小，质量较差；②以M199与mM199作为基础培养基时，卵母细胞成熟率分别为63.3％和79.3％，差异极为显著(P＜0.01)；③培养液中不添加血清与添加血清时卵母细胞成熟率分别为60.3％和33.8％，差异极为显著(P＜0.01)。无血清组卵丘细胞扩散较差；④由直径＜2mm、2mm-8mm和＞8mm卵泡获得的卵母细胞成熟率分别为21.7％，64.9％和82.4％，＜2mm一组与另两组成熟率差异极为显著(P＜0.01)。直径＞8mm一组成熟卵母细胞卵周隙中有较多碎片，形态上质量较差；⑤卵巢运输温度为25～30℃、30～35℃、35～39℃以及35～39℃且操作温度为37℃时，成熟率随温度升高而升高(4.0％，22.9％，49.0％，60.3％)，有显著性差异，运输温度较低时成熟卵母细胞质量较差。 2．对电场强度、脉冲次数和卵龄对猪卵母细胞电激活的影响进行比较。随着电场强度增加(100～200V／mm)，卵裂率和卵母细胞裂解率也逐渐升高；由电场强度为150V／mm，脉冲时程60us的电刺激取得较好结果(无裂解卵母细胞，卵裂率81.6％)；分别给予1次、2次和3次150V／mm，60us的电刺激，均可激活卵母细胞，但随脉冲次数增加，裂解率增加，以2次电脉冲效果较好(无裂解卵母细胞，卵裂率71.4％)；体外成熟40，44，48和52h猪卵母细胞用2次150V／mm，60us电刺激激活，卵母细胞裂解率为0.0％、0.0％、0.0％和10.7％，卵裂率为66.7％、75.0％、82.8％和84.0％，以IVM 48h卵母细胞得到较好结果。 3．在有无颗粒细胞饲养层基础上，分别用M199+10％FBS和NCSU-23为培养液培养猪孤雌激活卵母细胞。结果表明，无论有无饲养层，以M199+10％FBS为培养液时卵裂率均低于以NCSU-23为培养液的卵裂率，有显著性差异；以NCSU-23为培养液无饲养层培养猪激活卵母细胞，卵裂率为93.2％，囊胚率为31.8％。人一猪异种细胞核移植研究4.分别用分离单细胞接种培养和组织块培养两种方法成功分离人胎儿成纤维细胞和 成体皮肤成纤维细胞。利用成纤维细胞和上皮细胞贴壁时间和对消化液敏感程度不 同，可以对成纤维细胞进行纯化。两种不同来源成纤维细胞经冷冻保存，解冻后复 苏存活率为88.7%和857%。第3代冷冻解冻后成体皮肤成纤维细胞染色体组型: Zn二46，根据着丝粒指数分为4组，1.5号为中部着丝粒，6一12号为亚中部着丝粒， 13一22号为近端着丝粒，23号为性染色体。表明，两种来源细胞在传代初期保持了 良好的生活形态，经取材，保存和传代消化等处理没有引起染色体水平的变异。5.通过胞质内注射法将供体细胞核移入体外成熟43一44h去核猪卵母细胞内，电刺激 激活重构胚。比较人胎儿/成体成纤维细胞作为核供体时对核移植的影响，卵裂率 分别为47.8%和46.7%，无显著性差异(P>0.05);正常换液和传代的人胎儿成纤 维细胞与经高密度抑制培养的人胎儿成纤维细胞用作核供体进行核移植，卵裂率分 别为39.0%和40.4%，无显著性差异(P>0.05):以NCSU一23为培养液，采用微滴 法和四孔板法培养核移植重构胚，卵裂率分别为44.4%和47.4%，桑堪胚率为7.1% 和8.9%，无显著性差异(P>0.05)。6.用胞质内直接注射法将人胎儿成纤维细胞注入猪卵母细胞构建人一猪异种重构胚， 卵裂率为47.4%，囊胚率为0.7%。表明猪卵母细胞胞质可以对人胎儿成纤维细胞 重新编程并支持重构胚的早期发育。