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背景肝癌（HCC）是一种没有明确临床病理学定义的恶性消化系统肿瘤,严重威胁人类的健康[1-3]。HCC的复发率和死亡率高,5年生存率不到15%,而在中国为10.1%[4]。在HCC患者中,男性多于女性。HCC的治疗方法有多种,最常用的有效治疗是手术切除和使用化疗药物如Sorafenib等[5]。但是,手术切除对病人的身体伤害大,一般的化疗药物虽然有助于部分病人的病情,但是对于晚期HCC患者的治疗依然不乐观,所以需要寻找更好的和更有效的药物用于治疗HCC。HCC细胞具有无限增殖的特性,而蛋白酶体抑制剂（proteasome inhibitors,PIs）可以通过抑制肿瘤细胞的周期,阻止其无限增殖,PIs尤其可以选择恶性程度高的肿瘤细胞首先发挥毒性作用。因此,选择PIs治疗HCC是有希望的。MG132是PIs中的一种,更是一种天然的PIs。并且,已经证明MG132能够对HCC细胞发挥毒性作用[6]。MG132对HCC细胞的毒性作用涉及多种途径,如p53、MAPK和AKT,以及多种基因如TRAIL等[7-9]。但是MG132在治疗HCC细胞中的更加全面的调控机制并不是很清楚。为了MG132能够更早更好的应用临床治疗HCC,对MG132治疗HCC的调控机制进行更加深入全面的探讨是有必要的。SIRT2是一种去乙酰化酶,与一些E3泛素连接酶具有相互作用。SIRT2参与细胞的有丝分裂,通过细胞周期影响细胞的增殖。并且,SIRT2在HCC组织和细胞中高表达,与HCC的恶性程度呈正相关。有证据证明,慢病毒介导的SIRT2沉默能够抑制HCC细胞的增殖,说明SIRT2的下调将有助于HCC的治疗[10]。但是,在使用MG132治疗HCC的过程中是否能够引起SIRT2下调,并没有研究。因此,为了全面地了解MG132在治疗HCC过程中的功能,在HCC细胞中展开对MG132和SIRT2的研究是有必要的。目的本研究通过初步探讨MG132在抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞的凋亡和自噬的调控机制,旨在阐明SIRT2在MG132处理SMMC-7721细胞过程中的作用。并且通过对MG132抑制SMMC-7721细胞增殖过程中机制的研究,为MG132治疗HCC提供更多的理论依据,最终将有助于治疗HCC新药物的开发。方法1.选取HCC细胞株SMMC-7721细胞做为研究对象,用MTT检测2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM和80μM浓度的MG132培养SMMC-7721细胞24 h的细胞活力。2.用20μM的MG132培养SMMC-7721细胞24 h,用hoechst33258染色检测是否有凋亡小体;western blot检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase3的变化;用MDC染色检测自噬小体;western blot检测自噬蛋白LC3I和LC3II的变化。3.选取20μM MG132培养SMMC-7721细胞6 h、12 h和24 h,用western blot检测SIRT2、LC3I、LC3II、ATG7、STAT3和P-STAT3的变化。4.SIRT2转染SMMC-7721细胞。5.20μM MG132培养正常、转染PCDNA3.1-HA质粒和转染SIRT2-PCDNA3.1-HA质粒的SMMC-7721细胞株6 h、12 h、18 h和24 h,用MTT检测细胞的抑制率。6.20μM MG132培养转染PCDNA3.1-HA质粒和转染SIRT2-PCDNA3.1-HA质粒的SMMC-7721细胞株24 h,用western blot检测LC3I和LC3II的变化;用MDC染色比较两种细胞自噬程度的差异;用细胞凋亡流式和hoechst33258染色比较两种细胞凋亡程度的差异。结果1.MTT结果表明,随着MG132浓度和时间的增加SMMC-7721细胞的增殖受到明显的抑制。2.MDC和hoechst33258染色以及western blot结果看出,使用20μM MG132处理SMMC-7721细胞24 h,与对照组相比MG132处理组细胞出现了的凋亡和自噬特征。3.选择20μM MG132培养正常SMMC-7721细胞6 h、12 h和24 h,SIRT2的蛋白表达水平在12 h和24 h出现了明显的下调;同时自噬相关蛋白ATG7表达上调和标志性蛋白LC3II表达上调;同时检测到P-STAT3下调。4.选择20μM MG132培养细胞24 h,MTT检测到正常细胞株和转染PCDNA3.1-HA质粒细胞株的抑制率高于转染SIRT2-PCDNA3.1-HA质粒细胞株。5.选择20μM MG132培养SMMC-7721细胞24 h后,western blot、MDC染色、细胞凋亡流式和hoechst33258染色的结果显示,转染PCDNA3.1-HA质粒细胞株和自噬特征比转染SIRT2-PCDNA3.1-HA质粒细胞株凋亡现象更加显著。结论1.MG132能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡和自噬。2.MG132通过下调SIRT2抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞的凋亡和自噬。